一、重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响（论文文献综述）
王珍梅[1]（2021）在《藏猪和大约克猪脂肪组织代谢模式探索分析》文中进行了进一步梳理在猪生产养殖过程中,脂肪沉积性状是倍受关注的经济性状之一。猪肉脂肪沉积量及沉积形式直接影响猪肉品质和生产效率,是消费者考虑的重要因素,直接关系着养猪行业的经济发展。本试验以我国特有地方小型猪种藏猪（Tibetan pig,TP）和国外引进大型猪种大约克猪（Large Yorkshire pig,LW）为研究对象,分别饲养至30日龄、90日龄、180日龄,采集其背脂组织为研究材料,利用转录组测序技术（RNA-seq）对猪背脂组织中参与脂肪沉积的关键基因进行筛选,初次对高原藏猪与大约克猪背脂组织中关于脂肪沉积的分子机制进行研究。同时采用RT-q PCR技术对筛选出的关键候选基因进行m RNA水平上的定量分析,用于验证RNA-seq测序数据的准确性,进一步研究这些基因在猪脂肪组织中的调控机制。使用转录组测序技术检测30日龄、90日龄、180日龄TP背脂组织中基因表达情况,共检测到25 201个基因表达,其中3个生长阶段共表达基因为20 123个。以Padj<0.05和|log2Fold Change|>0的条件作为差异表达基因（DEGs）的筛选标准,筛选出160个DEGs在3个生长阶段中共表达。最后对筛选出的160个DEGs进行GO条目和KEGG Pathway通路富集,结合通路注释及前人研究,最后筛选出ACAD11、IGF1、ADAM22、AGPAT2、TP53INP2、FGF18、CLMP、B4GALT5等8个重要DEGs,分别与脂质合成、代谢功能相关。使用转录组测序技术检测30日龄、90日龄、180日龄LW背脂组织中基因表达情况,共检测到25 317个基因表达,其中三个生长阶段共表达基因为20 515个。同TP一样的筛选标准,筛选出53个DEGs在3个生长阶段中共表达。最后对筛选出的53个DEGs进行GO条目和KEGG Pathway通路富集,结合通路注释及前人研究,最后筛选出DHCR7、HIF3A、GFPT2、PCK1、IGF2BP2等5个重要DEGs,分别与脂质合成、代谢功能相关。对TP和LW转录组测序数据联合分析,在两个品种背脂组织中,共检测到32 747个阳性表达基因,其中共表达的有28 565个。以Padj<0.05和|log2Fold Change|>0的条件筛选出324个DEGs。进一步对DEGs进行GO与KEGG Pathway功能注释,共确定了21个与脂肪代谢、脂肪酸合成相关的DEGs。通过对21个基因的FPKM值进行统计分析及综合其相关功能研究,以FPKM值在TP的30日龄、90日龄、180日龄中逐渐升高为条件,筛选出3个（IDI1、PLAC8、LAP3）关键候选基因;以FPKM值在LW的30日龄、90日龄、180日龄中逐渐升高为条件,筛选出5个（ACACA、SLC2A4、THRSP、ELOVL5、CHPT1）关键候选基因。对筛选出来的关键候选基因进行RT-q PCR水平验证,结果与转录组学数据趋势一致。RT-q PCR结果与猪背膘厚相关性分析显示,TP背膘厚与ACACA、SLC2A4和THRSP基因呈极显着正相关,LW背膘厚与IDI1、ACACA、ELOVL5、LAP3、PLAC8、SLC2A4、THRSP基因表达都呈极显着正相关,TP和LW背膘厚都与CHPT1基因表达呈极显着负相关。从相关性分析结果表明,ACACA、SLC2A4和THRSP基因可能在猪脂肪沉积性状中具有正向调控作用,而CHPT1有负向调控作用。综上所述,本文对TP和LW3个日龄阶段的背脂组织进行转录组测序分析,筛选出多个与脂肪沉积性状相关的差异表达基因,并对8个关键候选基因进行m RNA水平鉴定和与背膘厚进行相关性分析,为进一步研究猪脂肪沉积调控机制及生长发育机制奠定基础。
高铎,魏婧雅,孙鹏[2]（2019）在《营养因子对瘦素及其受体基因表达的影响》文中研究指明瘦素是由脂肪细胞中的肥胖基因编码的蛋白质类激素,由脂肪组织合成和分泌,作用于下丘脑并发出可用能量储备的信号,进而抑制食欲和食物摄入,增加能量消耗,调节体质量。瘦素基因和瘦素受体在机体能量平衡和脂肪组织沉积中起着重要的调节作用,营养成分可通过多种途径来调控其基因的表达,进而影响机体的代谢过程。本研究就脂肪及脂肪酸、蛋白质及氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质、植物及植物提取物、激素等营养因子对瘦素及其受体基因的表达作用及其调控机制做简要概述。
张飞燕[3]（2017）在《藏猪IGF-1成熟肽cDNA的克隆表达及活性分析》文中研究表明类胰岛素生长因子-1（Insulin-like growth factor 1,IGF-1）是从动物血清中发现的一种能调控动物机体生长、发育和代谢的一个重要因子,不仅可以促进细胞对氨基酸和葡萄糖的摄取,增加蛋白、脂肪和糖原等的合成,还能刺激DNA复制、细胞增殖分化,刺激性腺分泌性激素,促进泌乳及新生动物小肠发育。猪血浆中IGF-1水平与体重及增重呈正相关,IGF-1基因可以作为影响动物生长发育的候选基因。目前尚无关于藏猪IGF-1表达的报道,本文首次对藏猪IGF-1成熟肽基因进行克隆,构建IGF-1成熟肽的原核表达载体pET-32a-IGF-1和真核表达载体pPIC9K-IGF-1,实现其在大肠杆菌BL21（DE3）和毕赤酵母GS115中的表达,为进一步研究藏猪IGF-1成熟肽的生物学功能及在藏猪生长发育过程中的调节作用提供参考。1.IGF-1基因全长序列的扩增及生物信息学分析根据GenBank中猪IGF-1基因序列（登录号:DQ121132）设计引物,提取藏猪肝脏组织总RNA,应用RT-PCR技术从藏猪肝脏克隆出IGF-1基因,将藏猪IGF-1基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-IGF-1,经PCR鉴定、测序及分析得该基因大小为612 bp,包含一个完整的ORF,该ORF共有462个核苷酸,编码153个氨基酸,所测得的藏猪基因序列与Muller等报道的猪IGF-1基因编码序列高度同源,同源性为100%,与野猪、湖北猪的亲缘关系最近,遗传距离在0～0.003之间,与牛、羊、人、犬、鹿的同源性也比较高,均在90%以上,遗传距离在0.068～0.075之间,而与鼠和鸡的同源性较低,分别为87.2%和70.5%,表明IGF-1基因序列具有高度的保守性。2.IGF-1成熟肽cDNA的扩增及在大肠杆菌中的表达以pMD19-T-IGF-1质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽基因并构建成熟肽pET-32a-IGF-1表达质粒,转入大肠杆菌BL21（DE3）,对IPTG诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度进行优化,Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白后采用Western blot对其鉴定,并用CCK8法检测纯化后的IGF-1融合蛋白的生物活性。结果显示,获得藏猪IGF-1成熟肽基因序列（315bp）并成功构建原核表达载体pET-32a-IGF-1;重组大肠杆菌BL21-IGF-1主要以包涵体形式表达,分子量约31 KDa,最优IPTG浓度为0.5mmol/L,最佳IPTG诱导时间为10h,最优IPTG温度是18℃;经SDS-PAGE和Western blot鉴定IPTG诱导表达和纯化的蛋白为IGF-1融合蛋白,且纯化获得了高纯度的融合蛋白;CCK8法检测纯化后的IGF-1重组蛋白能够促进细胞增殖。结果表明成功构建了表达质粒pET32a-IGF-1及获得重组大肠杆菌BL21-IGF-1,藏猪IGF-1成熟肽融合蛋白具有生物活性。3.IGF-1成熟肽序列的扩增及在毕赤酵母中的表达据GenBank中猪IGF-1基因设计一对引物,下游引物后端直接加上his尾巴和c-myc标签,以构建的藏猪pMD19-T-IGF-1重组质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽基因序列,并将其克隆于表达载体pPIC9K,获得重组穿梭质粒pPIC9K-IGF-1,电转毕赤酵母GS115感受态,对重组酵母转化子经MM、MD平板筛选和PCR鉴定后,经G418抗性梯度筛选,获得多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达后进行Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析。结果表明,Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析显示IGF-1蛋白在毕赤酵母GS115获得成功表达,目的蛋白相对分子质量约为13 KDa;CCK8法检测纯化后的IGF-1重组蛋白能够促进猪淋巴细胞增殖。结果表明本研究成功构建了藏猪IGF-1成熟肽真核表达质粒pPIC9K-IGF-1,并在毕赤酵母GS115中得到了有效表达,表达产物具有促进细胞增殖的生物活性。
邢凯[4]（2015）在《整合转录组及全基因组重测序方法鉴定影响猪脂肪沉积的关键基因及其变异》文中指出猪的脂肪沉积的多少严重影响着猪肉的生产效率、猪肉品质、繁殖性能以及消费者对猪肉的选择。本研究通过B型超声波背膘仪对松辽黑猪和长白猪群体进行活体背膘厚度的测定,筛选出具有极端背膘厚度的个体。利用高通量测序技术检测筛选出的具有极端背膘厚度的松辽黑猪和长白猪的背部皮下脂肪（各3对）和肝脏（各2对）的转录组,筛选出差异表达基因,确定在脂肪组织和肝脏中调控脂肪沉积的关键基因。同时,针对每个品种不同极端厚度的群体（高、低）的基因组进行混池重测序,找到2组之间的基因变异。通过整合转录组数据、重测序数据及QTL数据库等以及功能基因组学、生物信息学等方法,分析差异表达基因、基因变异的变化规律及相互关系,筛选、鉴定并验证影响猪脂肪沉积的候选基因及其变异。本研究对比了不同的品种及不同表型个体间的肉品质。松辽黑猪与长白猪的肉色之间有着显着的差异,同时又有着更高的肌内脂肪含量和更低失水率。而在同一品种的不同背膘厚度的群体之间,只有肌内脂肪含量有极显着的差异,其他肉品质之间并没有显示出差异。通过转录组测序,在具有极端背膘厚度的松辽黑猪的脂肪组织和肝脏中,分别找到了188个和91个差异表达基因。在长白猪的脂肪组织和肝脏中,也分别找到了552个和72个差异表达基因。通过生物学功能分析发现,差异表达基因参与了脂肪酸合成、脂肪合成底物的合成、脂类代谢的激活、胰岛素信号通路、PPAR信号通路、MAPK信号通路、PPAR信号通路等众多与脂肪沉积相关的生物学过程。这些与脂肪合成、代谢相关的基因如1ASN、PCK1、ME1、ELOVL6可以被认为影响脂肪沉积多少的候选基因。同时,在脂肪组织中找到了大量的免疫相关的差异表达基因,结果表明脂肪组织作为一个免疫器官,脂肪沉积的多少直接影响着脂肪组织在免疫中的作用。通过全基因组重测序中,在整个基因组中找到了大量基因变异,包括SNP和插入缺失,这些基因变异大部分坐落在基因间或内含子上。同时针对含有可能影响基因表达和功能的错义突变、移码突变的基因进行功能富集分析,发现在脂肪合成、转运、储存、代谢等通路上含有大量的遗传变异。大量位点的发现为进一步研究影响脂肪沉积提供了基础。最后整合转录组测序和全基因组重测序的结果,找到关键差异表达基因上的变异。在脂肪酸合成的关键基因FASN、ACACA、ME1、PCK1等上找到很多的变异,特别是存在这些基因的错义突变、UTR突变等,都是可能影响脂肪沉积的重点突变。本研究发现了脂肪合成关键的基因如ELOVL6、LDHA、CYP2B224坐落在脂肪沉积相关的QTL上。本研究同时挑选出了部分变异位点,与背膘厚度进行关联分析,发现ME1、PCK1基因UTR区上变异位点显着影响背膘的厚度。综上所述,脂肪组织中的脂肪酸合成能力是影响背膘厚度的关键因素,同时肝脏和脂肪组织中的代谢也发挥着重要的作用。研究结果全面阐述了不同背膘厚度的松辽黑猪和长白猪脂肪组织和肝脏基因表达谱及基因组的变异,为深入研究猪脂肪沉积的分子调控机制及进一步的实验奠定了基础。
胡义洁,吴明明,朱艳菲,孙金海[5]（2014）在《SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测转双基因猪pGH基因与IGF-1基因的表达》文中提出为确定猪生长激素基因（pGH）与胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在F0代保育期转双基因猪和同窝非转基因猪体内mRNA水平的表达差异情况,利用SYBR GreenⅠReal-time PCR法检测精子介导纳米基因载体法获得的F0代2月龄转基因猪pGH基因与IGF-1基因的mRNA表达水平,根据荧光定量结果绘制熔解曲线和扩增曲线图谱,分析图谱并用F=（1+E）-ΔΔCt公式计算其相对表达量。结果表明:F0代转双基因猪pGH基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1.2倍,IGF-1基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1.53倍,说明这2种外源基因均成功导入,并能在猪体内表达。本实验建立了能够稳定测评家猪生长激素与胰岛素样生长因子-1基因表达水平的方法,为进一步分析pGH-IGF-1生长轴对家猪生产性能的具体影响及转基因的实际应用提供了分子生物学方面的资料。
何凌云[6]（2014）在《不同日粮对长白猪和巴马香猪细胞因子与激素水平的影响》文中研究表明为了揭示中外猪种表现不同抗病力的免疫学基础及生长轴激素调节生长发育的分子机制,本试验以5周龄长白猪和巴马香猪为研究对象,在两种不同营养水平条件下分三个阶段饲养后屠宰采样,测定了两类型猪血清细胞因子和激素水平,分析了空肠、脾脏、肌肉与肝脏中细胞因子mRNA表达水平及肌肉与肝脏中激素受体mRNA表达水平。结果如下：1、血清细胞因子浓度与组织mRNA表达水平阶段一同一猪种血清TNF-α浓度,地方日粮组高于NRC日粮组（P<0.05）；阶段三巴马香猪血清IL-2浓度,NRC日粮组显着高于其他各组（P<0.05）；三个阶段巴马香猪血清IL-10浓度,地方日粮组均显着高于其他各组（P<0.05）；阶段二,空肠IL-4mRNA表达同一日粮间巴马香猪显着高于长白猪（P<0.05）；阶段三,空肠IL-6、IL-10（阶段二相反）、IL-1β、IFN-γ（包括阶段一、阶段二）、TNF-α和TGF-β1（包括阶段二）mRNA表达,均为同一日粮间长白猪高于巴马香猪（P<0.05）；阶段一,脾脏IL-2、IL-6（包括阶段二、阶段三）、IL-10（包括阶段三,但阶段二相反）和TGF-β1mRNA表达,均为同一日粮组间长白猪显着高于巴马香猪（P<0.05）。2.血清激素水平及其组织受体mRNA表达水平阶段一,同一日粮组间血清GH水平巴马香猪显着高于长白猪组（P<0.05）；在三阶段中,血清IGF-1水平均为长白猪显着高于巴马香猪；阶段三,血清SS水平巴马香猪显着高于长白猪（P<0.05）；同一日粮组背最长肌GHR（阶段一）和IGF-2（包括三个阶段）mRNA表达水平,均为长白猪显着高于巴马香猪（P<0.05）；阶段二IGF-1R和IGF-2R mRNA表达水平,长白猪地方日粮组显着低于其他各组（P<0.05）；阶段二IGFBP-3和IGFBP-5mRNA表达水平,巴马香猪显着高于长白猪（P<0.05）；在阶段二与阶段三（阶段一相反）,巴马香猪TGF-β1mRNA表达水平显着高于长白猪（P<0.05）；阶段一股二头肌GHR、IGF-1、IGF-1R、IGF-2R、IGFBP-3、IGFBP-5和TGF-pl mRNA表达水平,同一日粮组巴马香猪显着高于长白猪（P<0.05）；阶段二IGF-1R、 IGFBP-3和TGF-β1、mRNA表达水平与阶段一相反；三个阶段IGF-2mRNA表达水平,均为长白猪显着高于巴马香猪（P<0.05）；阶段二肝脏中GHR和IGF-1R （阶段三相反）mRNA表达水平,相同日粮组巴马香猪显着高于长白猪（P<0.05）；阶段一IGF-1、阶段二与阶段三IGFBP-3和阶段三TGF-β1mRNA表达水平,均为长白猪高于巴马香猪（P<0.05）。试验结果表明,不同品种猪细胞因子血清浓度与组织mRNA表达水平、血清激素水平及其组织受体mRNA表达水平存在差异,且不同日粮间对其结果也有影响。
李维[7]（2013）在《猪生长激素模拟肽对鼠细胞中生长激素受体相关信号转导通路的影响》文中认为在国家自然基金资助的前期研究中,利用猪生长激素单克隆抗体为靶标,通过噬菌体随机12肽库的淘选,筛选出了与猪生长激素单克隆抗体特异性结合的噬菌体。提取其ssDNA并测序分析,筛选出同源性较高的氨基酸序列,结合计算生物学分析确定,猪生长激素模拟肽的氨基酸核心序列为PCLPHCNSTSD,依据该序列合成猪生长激素模拟肽。通过激光共聚焦显微镜观察、流式细胞技术分析等技术手段验证了猪生长激素模拟肽能够与肝细胞表面的细胞膜上生长激素受体相结合;并进一步证明了生长激素模拟肽是以诱导构象二聚化的方式激活生长激素受体。但猪生长激素模拟肽激活生长激素受体后的肝细胞内信号转导通路尚不清楚。机体分泌的生长激素在与生长激素受体结合后,是通过激活胞内的信号转导分子转导通路,使信号转导分子进入细胞核调节靶基因的转录而发挥生理作用。所以,猪生长激素模拟肽能否激活胞内信号转导分子转导通路是判断模拟肽的功能活性的最主要的观测指标之一。因此本研究采用自行建立的膜受体研究用的体细胞模型（大鼠原代肝细胞模型）与购买的生长激素受体研究公认细胞系模型（3T3-F442A,小鼠前脂肪细胞系）两种细胞模型为试验材料,通过对生长激素发挥作用关键的胞内信号转导通路——JAK-STAT和MAPK-ERK两条信号转导通路的研究为依据,来比对验证猪生长激素模拟肽能否激活胞内信号转导通路,发挥类似生长激素的功能活性作用。通过下列试验设计,经过系列试验,得到如下结果:（1）通过改良的两步胶原酶灌流法分离健康Wistar大鼠的肝细胞,培养后细胞形态良好,细胞存活率能达到94.23%,检测到白蛋白和尿素氮的分泌量均在细胞培养的第3～5 d分泌量最高,而乳酸脱氢酶的分泌量最低,确定了大鼠肝细胞功能最佳表现时期为培养的第3～5 d;MTT比色法进一步证明测定大鼠肝细胞的细胞活力最佳时期亦为培养的第3～5d;经特异性抗体MAB263结合效果鉴定,细胞膜上的生长激素受体受细胞分离的影响较小,其表面受体功能状态良好,以此确定了细胞试验适宜时间和条件,建立了用于细胞膜受体研究的肝脏细胞模型。（2）采用受体竞争结合技术及激光共聚焦观察技术,开展结合特性、共定位特性和竞争性结合特性系列试验研究,证明了猪生长激素模拟肽和猪生长激素（pGH）均能够特异性结合到大鼠肝细胞的生长激素受体上。同样又进行了猪生长激素模拟肽和pGH与细胞系3T3-F442A的细胞上的生长激素受体能够进行特异性结合的证明的试验研究,为下一步的信号转导通路研究的可靠性奠定了试验基础。（3）通过Western-blot和流式细胞分析技术,分析了猪生长激素模拟肽在大鼠肝细胞和3T3-F442A细胞在激活信号转导通路中的各种试验设计,结果显示猪生长激素模拟肽与pGH在启动JAK-STAT和MAPK-ERK信号转导通路,刺激STAT1、STAT3、STAT5和ERK1/2磷酸化的过程中存在相同的反应。检测到猪生长激素模拟肽刺激大鼠肝细胞和3T3-F442A细胞内信号转导因子磷酸化的最佳作用时间为20～40 min,最佳作用浓度为45～90nM,试验结果表明猪生长激素模拟肽在大鼠肝细胞模型（间接作用细胞模型）和3T3-F442A细胞模型上（直接作用细胞模型）均能够与pGH发挥相似的功能活性。（4）猪生长激素模拟肽在细胞培养中的添加试验,证实猪生长激素模拟肽能够影响肝脏细胞分泌IGF-I的量,同时也发现猪生长激素模拟肽能够促进对3T3-F442A的增殖分化,在细胞水平证明了猪生长激素模拟肽的生理作用。通过特定的鼠细胞模型,观测到猪生长激素模拟肽能够使生长激素受体活化后,进一步激活生长激素受体相关的细胞信号转导通路JAK-STAT和MAPK-ERK的多种磷酸化反应,从细胞水平证实猪生长激素模拟肽具有与猪生长激素相似的生物活性和功能。猪生长激素模拟肽发挥模拟猪生长激素功能的研究,为研制可替代激素生物活性的小分子物质和生长激素受体激动剂性质的肽类物质奠定了理论与技术基础。
郝哲[8]（2012）在《IGF-Ⅰ及受体基因mRNA在不同发育时期鹅肌肉组织中表达的研究》文中研究表明类胰岛素生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）是机体生长、发育和代谢的一个重要调控因子,是影响动物生长发育的主效基因之一,在细胞的分化、增殖、骨重建、胚胎发育及个体的生长等方面都起着十分重要的作用。本研究通过屠宰试验和实时荧光定量PCR法,以处于生长发育期的吉林白鹅肉用品系、蛋用品系和霍尔多巴吉白鹅为研究对象,检测了1、30、60及90日龄鹅的胸肌、腿肌组织中IGF-Ⅰ及受体的mRNA的表达情况,对不同遗传基础、不同时期的表达量进行比较,并将定量结果与胸肌腿肌率进行相关性分析,旨在探索鹅IGF-Ⅰ及受体基因mRNA表达与骨骼肌生长发育之间的相互关系,为揭示鹅骨骼肌生长发育规律的分子生物学基础提供参考数据。结果如下：（1）鹅肌肉IGF-Ⅰ基因mRNA的表达变化鹅胸肌、腿肌IGF-Ⅰ mRNA的表达量随着日龄的增加呈现先升后降的趋势,胸肌中IGF-Ⅰ mRNA的表达峰值在吉林白鹅肉用品系、蛋用品系和霍尔多巴吉白鹅分别于60、30和60日龄出现,其中霍尔多巴吉白鹅30日龄与1日龄差异不显着（P>0.05）；腿肌IGF-ⅠmRNA的表达量均在30日龄达到最大,随后下降。在胸肌组织中,肉用品系吉林白鹅的表达量在1、60和90日龄时均高于蛋用品系,霍尔多巴吉白鹅在1日龄和90日龄时高于蛋用品系吉林白鹅（P<0.05）,30日龄品种间差异不显着（P>0.05）。在腿肌组织中,肉用品系吉林白鹅在30和60日龄的表达量均高于霍尔多巴吉白鹅,在60和90日龄高于蛋用品系吉林白鹅（P<0.05）；霍尔多巴吉白鹅在30日龄时低于蛋用品系,90日龄时高于吉林白鹅两个品系（P<0.05）,1日龄时表达水平无差异（P>0.05）。IGF-Ⅰ mRNA的表达可能存在组织特异性。通过相关性分析发现：30、60、90日龄的霍尔多巴吉白鹅、肉用品系吉林白鹅以及60日龄的蛋用品系吉林白鹅胸肌重与IGF-Ⅰ mRNA的表达呈正相关（r=0.59,P<0.05）,而与胸肌中IGF-Ⅰ R mRNA无显着的相关性,本结果提示,与鸡类似,在鹅肌肉组织的众多生长因子中,IGF-Ⅰ的自/旁分泌作用可能对骨骼肌生长起主要作用。（2）鹅肌肉IGF-Ⅰ R基因mRNA的表达变化吉林白鹅肉用品系胸肌中IGF-Ⅰ R mRNA在出生后一直呈现出增长的趋势,在60日龄时达到峰值（P<0.05）,随后缓慢下降。霍尔多巴吉白鹅IGF-Ⅰ R mRNA在出生后迅速下降（P<0.05）,30日龄后开始缓慢回升,60到90日龄之间维持着这种态势（P<0.05）,而吉林白鹅蛋用品系胸肌中IGF-ⅠR mRNA的表达量波动较大,在30日龄时下降到最低（P<0.05）,60日龄时回升（P<0.05）,90日龄时又降到最低水平。肉用品系和蛋用品系吉林白鹅腿肌中IGF-Ⅰ R mRNA的表达模式相近,在出生后迅速上升,在30日龄达到最高峰,随后开始下降,不同的是肉用品系吉林白鹅在30-60日龄IGF-Ⅰ R mRNA下降缓慢（P>0.05）,从60日龄开始剧烈下降（P<0.05）,90日龄下降到出生水平（P>0.05）；而蛋用品系腿肌中IGF-Ⅰ R mRNA在30日龄开始剧烈下降（P<0.05）,在60日龄下降到出生水平（P>0.05）,并一直维持着较低的水平。霍尔多巴吉腿肌中IGF-Ⅰ RmRNA的表达波动较大,在30日龄是下降到最低（P<0.05）,60日龄时略有上升,90日龄是又降到最低水平。IGF-Ⅰ R基因在不同日龄、不同遗传基础鹅的胸肌和腿肌组织中的表达存在差异,蛋用品系吉林白鹅胸肌中IGF-Ⅰ R mRNA的表达量在1和90日龄均显着高于霍尔多巴吉白鹅（P<0.05）,但与肉用品系吉林白鹅差异不显着（P>0.05）,且在这两个时期肉用品系与霍尔多巴吉白鹅无差异（P>0.05）；30及60日龄时肉用品系吉林白鹅胸肌中IGF-Ⅰ R mRNA的表达量均高于霍尔多巴吉和蛋用品系吉林白鹅（P<0.05）；蛋用品系吉林白鹅和霍尔多巴吉腿肌中IGF-Ⅰ R mRNA的表达量在30及60日龄差异不显着（P>0.05）,但在这两个时期肉用品系吉林白鹅IGF-Ⅰ R mRNA的表达量均显着高于霍尔多巴吉白鹅（P<0.05）,与蛋用品系无差异（P>0.05）。1日龄和90日龄,三种鹅腿肌间IGF-Ⅰ R mRNA的表达量差异不显着。这些研究结果表明IGF-Ⅰ R mRNA在胸肌和腿肌中的表达模式存在较大的种间和组织差异。（3）通过相关性分析发现：30、60、90日龄的肉用品系吉林白鹅,60、90日龄的霍尔多巴吉白鹅胸肌中IGF-Ⅰ mRNA的表达量与胸肌率呈正相关,而与胸肌中IGF-ⅠRmRNA无显着的相关性。各时期胸肌腿肌中IGF-Ⅰ R mRNA表达量与胸、腿肌率也没有显着相关性。
邓景致[9]（2012）在《版纳微型猪近交系生长相关基因遗传背景分析》文中提出版纳微型猪，为云南西双版纳州的地方猪种，主要特点表现为体型矮小，生长速度缓慢而性成熟早。版纳微型猪经20多年近交繁育，近交系数在2005年就达到98.6％。版纳微型猪是研究实验动物模型和异种器官移植的适合实验材料，同时也是研究小型猪矮小机理的理想矮小猪模型。本实验以版纳微型猪为矮小猪模型，以正常体型的军牧猪和大白猪为对照，探索猪的矮小机制。并以生长激素及其受体、垂体转录因子、生长抑素及生长素为候选基因，试图发现导致版纳微型猪生长迟缓的关键基因或多态位点，为进一步探索猪的矮小机理提供基础研究资料。主要研究成果如下：1.3月龄的版纳微型猪血清GH含量略低于其它猪种，但差异不显着；版纳微型猪血清IGF-1含量低于大型猪，并且差异显着（P﹤0.05）。2.克隆并测序了猪GH基因全序列及cDNA序列，版纳微型猪的GH基因全序列及cDNA序列已登录GenBank，登录号分别为JF276445、JF276447。在GH外显子2内发现版纳微型猪存在C509T、T597C、G548A，外显子4存在T1202C突变；其中C509T、T597C和T1202C突变分别导致版纳猪GH蛋白序列A9V、R22Q和S104P的变异。蛋白序列A9V和R22Q的变异位于信号肽编码区，可能影响GH在胞内的转运和定位，S104P的变异可能影响GH的生物活性。经生物学分析，在测定的45个序列中发现单倍型24个，猪品种间单倍型多样度为0.681，版纳微型猪的核苷酸多样度最贫乏，Pi=0.00373±0.00038；GH基因在品种间出现明显的遗传分化。3.克隆并测序了猪GHR基因cDNA序列，版纳微型猪的GHR的cDNA序列已登录GenBank，登录号为JF276446。经同源性分析，版纳微型猪的GHR外显子10内，发现4处氨基酸改变，即G1143T、G1225T、C1666G和C1739G导致了E381D、A409S、L556V和A580G的变异，其中L556V、A580G同军牧一号；其它位点的变异都是同义突变，未引起相应编码氨基酸的变化。版纳微型猪GHR蛋白胞内域的4个突变点同已发表的五指山猪和广西巴马小型猪一致，结果表明，猪GHR胞外域与跨膜区相对保守而胞内域易变异。G1225T突变导致丝氨酸替换丙氨酸，此处突变氨基酸的性质差异较大，可能影响生长激素受体的蛋白空间结构进而影响其功能。对GHR外显子10进行PCR-SSCP分析，发现18种基因型，引物P2扩增片段内基因型和基因频率品种间差异显着（P﹤0.05），版纳微型猪具有独享基因型。4.克隆测序了SS的全基因序列、PIT-1和Ghrelin的大部分序列。只有在SS基因的A110G导致Lys→Arg突变；基因的大部分变异在内含子区域，未影响成熟肽的结构和功能。此结果指示版纳微型猪的SS、PIT-1和Ghrelin不含有显着性突变。5.实时荧光定量PCR法检测GH、GHR、IGF-1基因分别在脑垂体、肝脏和肌肉组织的表达规律，结果显示GH、GHR基因在猪种间组织表达量差异不显着（P>0.05）；IGF-1基因在版纳微型猪肝脏组织中表达量最低，且差异显着（P<0.05）；由此初步推断，GH及其受体基因的变异可能阻碍了GH-GHR-IGF信号传导通路，IGF-1表达受阻，最终影响猪的正常生长。6.构建了版纳微型猪和军牧猪的GH、GHR基因的真核表达载体，并转染猪肾细胞PK-15进行表达，检测IGF-1表达上调水平。结果表明转染版纳微型猪GHR基因的细胞IGF-1表达量最低，推测GHR基因变异导致的氨基酸替换可能会影响其下游的信号转导。本研究通过对内分泌生长轴相关重要基因进行序列分析和功能验证发现版纳微型猪GHR基因的变异，是导致其生长迟缓的主要原因。
吴丹[10]（2012）在《广西巴马小型猪生长轴关键基因研究》文中研究表明动物生长发育是一系列复杂而精细的生物代谢过程,遗传基因和激素调节对其产生重要影响。生长调控系统中,各因素对生长的调节主要是通过生长激素轴（GH-IGF轴）实现的。为探讨广西巴马小型猪矮小性状形成的分子机理,本试验对广西巴马小型猪生长轴上几个关键基因多态性和表达规律进行了系统研究,试验结果表明：1：不同日龄巴马小型猪血清GHR与IGF-I的浓度检测。分别采集广西巴马小型猪和长白猪1日龄、30日龄、180日龄血液样本,应用Elisa方法检测血清中GHR与IGF-I的浓度,结果表明：两个猪种GHR和IGF-1血清质量浓度均呈现先降低后升高的趋势。长白猪GHR及IGF-I血清质量浓度显着高于广西巴马小型猪,其中GHR分别为小型猪的7.94、4.82和1.89倍,IGF-I分别为小型猪的2.91、1.73和1.24倍。2：巴马小型猪生长轴关键基因多态性研究：应用高分辨熔解曲线方法（HRM）检测分析了广西巴马小型猪和长白猪SS、GH、JAK2、IGF-I基因的多态性位点。结果显示：（1）4个检测基因在广西巴马小型猪群体内均无多态性。长白猪的SS,GH及JAK2基因分别存在有2、1和2个SNP位点。（2）广西巴马小型猪和长白猪相比,SS基因2个位点与GH基因1个位点的基因型频率差异极显着（P<0.01）,JAK2基因共存在9个差异位点,其中8个多态位点基因型频率差异在这两个品种间达到显着水平（P<0.05）。（3）将广西巴马小型猪和长白猪各基因外显子片段剪切后拼接,序列比对结果显示：两个猪种SS、GH和IGF-I基因差异位点均为同义突变,JAK2基因8个显着差异的位点中仅615bp、1874bp和3364bp三个位点为错义突变。3：克隆获得广西巴马小型猪和长白猪GHR基因：其编码区长1917bp,包含638个氨基酸残基。序列分析表明：广西巴马小型猪GHR基因与长白猪同源性为99.6%,cDNA序列共有6个氨基酸位点的差异：其中I309V位于酪氨酸激酶结合域；C390Y、S527N及D561N位于GHBP结合区；K205R、A217V在胞外域。蛋白质二级结构预测结果显示,K205R、A217V的突变对相应位置的结构未产生影响,但72～79位氨基酸肽段出现一定的分离。成功构建了广西巴马小型猪及长白猪GHR基因pEGFP-C1真核表达载体,为进一步研究GHR对矮小性状的影响打下基础。4：应用实时荧光定量PCR技术对广西巴马小型猪及长白猪1日龄、30日龄及180日龄肝脏组织样本,GHR、JAK2和IGF-I基因表达进行表达分析。结果表明：巴马小型猪3个检测基因从1日龄到30日龄表达量相对减少,而长白猪表达量相对增加。GHR、JAK2和IGF-I基因在三个检测时间点的表达量,长白猪显着高于广西巴马小型猪（P<0.05）,而1日龄表达量的显着差异,提示在出生时已经存在这些基因的表达差异。综上所述,可以推测GHR、JAK2基因与广西巴马小型猪矮小体型有密切关系。生长轴上各激素水平,尤其前期生长过程中GHR、IGF-I分泌的减少与GHR、JAK2、IGF-I基因转录差异共同对小型猪的矮小性状产生影响。
二、重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响（论文提纲范文）
（1）藏猪和大约克猪脂肪组织代谢模式探索分析（论文提纲范文）
| 资金项目 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 中国地方猪种的脂肪沉积性状的研究进展 |
| 1.1.1 中国地方猪种 |
| 1.1.2 脂肪沉积性状研究的意义 |
| 1.1.3 中国地方猪种脂肪沉积研究现状 |
| 1.2 西藏藏猪产业化开发现状 |
| 1.3 脂肪的沉积与分化 |
| 1.3.1 脂肪组织 |
| 1.3.2 脂肪的沉积和分化 |
| 1.4 脂肪沉积相关基因的研究进展 |
| 1.5 猪脂肪组织转录组学研究现状 |
| 1.5.1 转录组学 |
| 1.5.2 转录组学在研究猪脂肪沉积分子机制中的应用 |
| 1.6 藏猪和大约克猪品种特征 |
| 1.6.1 藏猪基本特性 |
| 1.6.2 大约克猪基本特性 |
| 1.7 研究目的和意义 |
| 1.8 技术路线 |
| 第二章 不同阶段藏猪背脂组织转录组学数据分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 试验动物 |
| 2.2.2 试验试剂及仪器 |
| 2.2.3 总RNA的提取 |
| 2.2.4 RNA-seq测序数据分析及生物信息学分析 |
| 2.3 结果和分析 |
| 2.3.1 RNA提取和质量检测 |
| 2.3.2 测序数据的分析结果 |
| 2.3.3 RNA-seq中基因表达水平情况 |
| 2.3.4 差异表达基因的筛选 |
| 2.3.5 不同阶段比较关键候选差异表达基因功能富集 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 不同阶段大约克猪背脂组织转录组学数据分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 试验动物 |
| 3.2.2 试验试剂及仪器 |
| 3.2.3 总RNA的提取及检测 |
| 3.2.4 RNA-seq测序数据分析及生物信息学分析 |
| 3.3 结果和分析 |
| 3.3.1 RNA提取和质量检测 |
| 3.3.2 测序数据的分析结果 |
| 3.3.3 RNA-seq中基因表达水平情况 |
| 3.3.4 差异表达基因的筛选 |
| 3.3.5 不同阶段比较关键候选差异表达基因功能富集 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 藏猪和大约克猪品种间背脂组织转录组数据联合分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 品种间背脂组织转录组数据联合分析 |
| 4.3 结果和分析 |
| 4.3.1 测序数据的分析结果 |
| 4.3.2 RNA-seq中基因表达水平情况 |
| 4.3.3 差异表达基因的筛选 |
| 4.3.4 两品种间关键候选差异表达基因功能富集 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 差异表达基因Real-time PCR技术验证 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 试验材料及方法 |
| 5.2.1 试验动物 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器 |
| 5.2.3 背脂组织RNA的提取及质量检测 |
| 5.2.4 c DNA合成 |
| 5.2.5 RT-qPCR引物设计及合成 |
| 5.2.6 实时荧光定量PCR |
| 5.2.7 统计分析 |
| 5.3 结果和分析 |
| 5.3.1 RNA提取结果 |
| 5.3.2 cDNA质量检测 |
| 5.3.3 荧光定量PCR引物验证 |
| 5.3.4 标准曲线结果 |
| 5.3.5 荧光定量PCR结果 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 关键候选基因RT-qPCR结果与脂肪沉积性状的相关性分析 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 试验材料及方法 |
| 6.2.1 试验动物 |
| 6.2.2 主要试剂和仪器 |
| 6.2.3 猪背膘厚测定 |
| 6.2.4 统计分析 |
| 6.3 结果和分析 |
| 6.3.1 荧光定量PCR结果 |
| 6.3.2 背膘厚测定结果 |
| 6.3.3 荧光定量PCR结果与背膘厚的联合分析 |
| 6.4 讨论 |
| 第七章 结论 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 需要进一步解决的问题 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）营养因子对瘦素及其受体基因表达的影响（论文提纲范文）
| 1 瘦素基因及其表达 |
| 1.1 瘦素基因 |
| 1.2 瘦素基因的表达 |
| 2 瘦素受体(ob-R)基因 |
| 3 瘦素的信号转导机制 |
| 4 营养因子对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.1 脂肪及脂肪酸对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.1.1脂肪对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.1.2 长链脂肪酸对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.1.3 短链脂肪酸对瘦素及其受体基因表达的调控 |
| 4.2 蛋白质、氨基酸对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.3 碳水化合物对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.4 矿物质、维生素对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.5 植物及植物提取物对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 4.6 激素对瘦素及其受体基因表达的影响 |
| 5 总结 |
（3）藏猪IGF-1成熟肽cDNA的克隆表达及活性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写字母表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 胰岛素样生长因子的简介 |
| 1.1 胰岛素样生长因子的发现 |
| 1.2 胰岛素样生长因子IGF-1的结构与特点 |
| 2 IGF-1的表达调控 |
| 2.1 营养对IGF-1的表达调控 |
| 2.2 激素对IGF-1的调控 |
| 3 IGF-1的生物学功能 |
| 3.1 IGF-1对动物生长性能的影响 |
| 3.2 IGF-1对动物免疫细胞的调节作用 |
| 4 pIGF-1在养猪业上的应用 |
| 5 本项目研究的目的与意义 |
| 第二章 藏猪IGF-1基因的克隆及生物信息学分析 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 猪肝脏 |
| 1.2 质粒与菌株 |
| 1.3 酶和试剂 |
| 1.4 PCR引物设计与合成 |
| 1.5 仪器 |
| 1.6 试剂及培养基的配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 藏猪IGF-1全长序列的扩增 |
| 2.1.1 藏猪总RNA的提取 |
| 2.1.2 RT-PCR |
| 2.2 pMD19-T-IGF-1质粒的构建与序列测定分析 |
| 2.2.1 IGF-1全长序列的纯化回收 |
| 2.2.2 目的片段与克隆载体的连接及转化子的鉴定 |
| 2.2.3 IGF-1全长序列的测序鉴定 |
| 2.3 IGF-1全长序列的生物信息学分析 |
| 2.3.1 生物信息学分析相关网址 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 藏猪肝脏组织总RNA的提取 |
| 3.2 目的基因的扩增 |
| 3.3 IGF-1基因多重序列比较分析 |
| 3.4 IGF-1全长序列比对分析及进化树的构建 |
| 3.5 藏猪IGF-1基因编码氨基酸的生物信息学分析 |
| 3.5.1 藏猪IGF-1基因编码氨基酸理化性质的分析 |
| 3.5.2 IGF-1信号肽分析 |
| 3.5.3 IGF-1的疏水性预测 |
| 3.5.4 IGF-1跨膜结构分析 |
| 3.5.5 IGF-1磷酸化位点分析 |
| 3.5.6 藏猪IGF-1氨基酸的初级结构和空间结构 |
| 4 讨论 |
| 第三章 藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 质粒及菌株 |
| 1.2 酶和试剂 |
| 1.3 试剂及培养基的配制 |
| 1.4 PCR引物设计与合成 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 藏猪IGF-1成熟肽基因扩增及重组表达载体pET-32a-IGF-1的构建 |
| 2.1.1 藏猪IGF-1成熟肽基因的扩增 |
| 2.1.2 重组表达载体pET-32a-IGF-1的构建 |
| 2.1.3 重组表达载体pET-32a-IGF-1的鉴定 |
| 2.2 融合蛋白的诱导表达与鉴定 |
| 2.2.1 pET-32a-IGF-1转化宿主菌E.coli.BL21 |
| 2.2.2 IGF-1融合蛋白的初步诱导表达 |
| 2.2.3 诱导剂IPTG浓度的优化 |
| 2.2.4 目标蛋白在大肠杆菌中的定位分析 |
| 2.2.5 目标蛋白的纯化 |
| 2.2.6 表达产物的Western blot鉴定 |
| 2.3 蛋白含量的测定 |
| 2.4 重组表达产物的活性分析 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 藏猪IGF-1成熟肽基因的扩增 |
| 3.2 重组表达载体pET32a-IGF-1构建与鉴定 |
| 3.3 重组融合蛋白的初步诱导表达 |
| 3.4 诱导融合蛋白表达IPTG浓度的优化 |
| 3.5 不同诱导时间的优化 |
| 3.6 不同诱导温度的优化 |
| 3.7 pET32a-IGF-1融合蛋白表达的可溶性分析 |
| 3.8 IGF-1融合蛋白纯化 |
| 3.9 IGF-1表达产物Western Blot鉴定 |
| 3.10 IGF-1蛋白含量的测定 |
| 3.11 重组表达产物的活性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 大肠杆菌表达系统 |
| 4.2 大肠杆菌诱导表达条件的优化 |
| 4.3 IGF-1蛋白的分离纯化 |
| 5 结论 |
| 第四章 藏猪IGF-1成熟肽真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 菌种与质粒 |
| 1.2 酶和试剂 |
| 1.3 引物的设计与合成 |
| 1.4 仪器 |
| 1.5 试剂及培养基的配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 IGF-1成熟肽基因的扩增及克隆载体的构建与鉴定 |
| 2.2 重组表达载体pPIC9K-IGF-1的构建与鉴定 |
| 2.2.1 目的基因和pPIC9K的EcoRI和NotI双酶切和连接转化 |
| 2.2.2 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态 |
| 2.2.3 阳性克隆的筛选与鉴定 |
| 2.3 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 |
| 2.3.1 GS115菌株的分离纯化 |
| 2.3.2 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 |
| 2.3.3 重组表达载体pPIC9K-IGF-1的线性转化 |
| 2.4 阳性毕赤酵母菌株的筛选 |
| 2.4.1 选择培养基鉴定重组酵母表型 |
| 2.4.2 重组菌株表型的PCR检测 |
| 2.5 高拷贝转化子的筛选 |
| 2.6 重组酵母的诱导表达 |
| 2.7 融合蛋白的分离纯化 |
| 2.8 目标蛋白的Dot Blot检测 |
| 2.9 BCA法测定蛋白浓度 |
| 2.10 重组表达产物生物活性的测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 藏猪成熟肽IGF-1基因的扩增和克隆载体的构建 |
| 3.2 重组表达载体pPIC9K-IGF-1的鉴定及其线性化 |
| 3.3 重组表达载体pPIC9K-IGF-1的线性化 |
| 3.4 重组酵母表型MM和MD平板的筛选 |
| 3.5 重组酵母表型的PCR鉴定 |
| 3.6 高拷贝转化子的筛选 |
| 3.7 重组酵母的诱导表达 |
| 3.8 纯化产物的Tris-Tricine-SDS-PAGE检测 |
| 3.9 IGF-1蛋白含量的测定 |
| 3.10 重组酵母表达上清和纯化蛋白的Dot-Blot检测 |
| 3.11 重组表达产物的功能分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 毕赤酵母表达系统 |
| 4.2 毕赤酵母的电击转化 |
| 4.3 毕赤酵母的诱导表达 |
| 4.4 酵母表达上清的处理与检测 |
| 4.5 酵母表达与原核表达相比较 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 测序结果 |
| 在读期间发表的学术论文 |
（4）整合转录组及全基因组重测序方法鉴定影响猪脂肪沉积的关键基因及其变异（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 脂肪沉积在猪育种中的重要作用 |
| 1.1.1 猪肉消费在我国的整体情况 |
| 1.1.2 脂肪沉积影响生猪的生产效率 |
| 1.1.3 脂肪沉积影响猪肉品质 |
| 1.1.4 脂肪沉积影响猪的繁殖性能 |
| 1.1.5 猪是很好的研究肥胖问题的动物模型 |
| 1.2 脂肪分化、发育研究 |
| 1.2.1 脂肪组织 |
| 1.2.2 脂肪细胞的来源和分化 |
| 1.2.3 脂肪代谢的基本过程 |
| 1.2.4 猪脂肪组织的发育规律 |
| 1.2.5 脂肪组织的功能 |
| 1.2.6 肝脏的功能 |
| 1.3 猪脂肪功能基因组研究 |
| 1.3.1 DNA 水平 |
| 1.3.2 RNA 水平 |
| 1.3.3 蛋白质水平 |
| 1.4 猪育种选择手段 |
| 1.4.1 常规育种 |
| 1.4.2 分子育种 |
| 1.5 本研究的目的意义、主要内容 |
| 第二章 试验群体构建及脂肪对肉质的影响 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验群体 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 群体的背膘活体测定 |
| 2.2.2 极端群体的选择 |
| 2.2.3 屠宰并取样 |
| 2.2.4 肉品质性状的测定 |
| 2.2.5 统计分析 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 极端个体的选择及校正背膘厚度的比较 |
| 2.3.2 脂肪相关性状的比较 |
| 2.3.3 肉品质性状的比较 |
| 2.3.4 单位面积肌肉纤维数目的比较 |
| 2.3.5 单位面积脂肪细胞数的比较 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 不同表型松辽黑猪脂肪组织、肝脏转录组测序与基因组重测序 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物与采样 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 松辽黑猪脂肪组织的转录组测序 |
| 3.2.2 松辽黑猪肝脏组织的转录组测序 |
| 3.2.3 定量PCR的验证 |
| 3.2.4 松辽黑猪全基因组的重测序 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 总RNA的质检结果 |
| 3.3.2 松辽黑猪脂肪组织转录组测序 |
| 3.3.3 松辽黑猪肝脏转录组测序 |
| 3.3.4 荧光定量PCR测序验证转录组测序的结果 |
| 3.3.5 松辽黑猪基因组重测序 |
| 3.3.6 整合分析松辽黑猪转录组测序与重测序数据 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 不同表型长白猪脂肪组织、肝脏转录组测序与全基因组重测序 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验动物与采样 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器和设备 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.3 试验结果 |
| 4.3.1 总RNA的质检结果 |
| 4.3.2 长白猪脂肪组织转录组测序 |
| 4.3.3 长白猪肝脏转录组测序 |
| 4.3.4 荧光定量PCR测序验证转录组测序的结果 |
| 4.3.5 长白猪基因组重测序 |
| 4.3.6 整合分析长白猪脂肪组织转录组测序与基因组重测序数据 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 整合转录组与QTL数据分析 |
| 5.1 转录组比较分析 |
| 5.1.1 松辽黑猪和长白猪脂肪组织中差异表达基因的比较 |
| 5.1.2 松辽黑猪和长白猪肝脏中差异表达基因的比较 |
| 5.1.3 本研究结果与其它相关研究的比较 |
| 5.2 与猪脂肪性状相关QTL数据库的比较 |
| 5.2.1 松辽黑猪差异表达基因与脂肪相关QTL的比较 |
| 5.2.2 长白猪差异表达基因与脂肪相关QTL的比较 |
| 5.3 小结 |
| 第六章 部分候选基因与脂肪性状的遗传分析 |
| 6.1 试验材料 |
| 6.1.1 试验群体 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 主要仪器 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 群体表型测定 |
| 6.2.2 猪尾组织及耳组织的基因组DNA提取 |
| 6.2.3 分型SNP位点的选择 |
| 6.2.4 飞行质谱SNP位点分型 |
| 6.2.5 多态位点与背膘厚度的关联分析 |
| 6.3 试验结果 |
| 6.3.1 猪基因组DNA提取结果 |
| 6.3.2 质谱SNP分型结果 |
| 6.3.3 多态位点与背膘厚度的关联分析 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 个人简介 |
（5）SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测转双基因猪pGH基因与IGF-1基因的表达（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 样品 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 引物设计与合成 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 组织总RNA提取与c DN A第1链获得 |
| 1.2.2 RT-PCR |
| 1.2.3 重组质粒标准品的制备 |
| 1.2.4 Real-time PCR检测方法的建立 |
| 1.2.5 重组质粒标准曲线的构建 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 普通PCR检测结果 |
| 2.2 总RNA的质量检测结果 |
| 2.3 RT-PCR结果RT-PCR电泳结果 |
| 2.4重组质粒pMD#19-T-p GH和p MD#19-T-IGF-1和p MD#19-T-B-actin的PCR鉴定 |
| 2.5 扩增曲线与熔解曲线分析 |
| 2.6 Ct值分析 |
| 2.7 质粒标准曲线的分析 |
| 2.8 相对表达量计算 |
| 3 讨论 |
（6）不同日粮对长白猪和巴马香猪细胞因子与激素水平的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪抗病育种研究进展 |
| 1.1 免疫应答与抗病育种 |
| 1.2 猪抗病相关基因研究概况 |
| 2 生长轴 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 生长轴对哺乳动物生长发育的调节作用 |
| 2.3 影响生长轴调节作用的因素 |
| 第二章 试验研究 |
| 1 不同日粮对长白猪和巴马香猪细胞因子血清浓度与组织mRNA表达的影响 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 2 不同日粮对长白猪和巴马香猪激素血清浓度及其靶组织受体组织mRNA表达的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 总结 |
| 1 本研究主要结论 |
| 2 本研究的创新点 |
| 3 有待进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 附录3 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）猪生长激素模拟肽对鼠细胞中生长激素受体相关信号转导通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 1.1 生长激素(GH) |
| 1.2 生长激素受体(GHR) |
| 1.3 JAK激酶(JAKs)家族 |
| 1.4 信号的转录因子和活化子(STATs)家族 |
| 1.5 丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族 |
| 1.6 细胞因子信号转导抑制蛋白(SOCS)家族 |
| 1.7 GH介导的主要信号转导通路 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 膜受体研究用体细胞模型和3T3-F442A细胞模型的建立 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 猪生长激素模拟肽与大鼠肝细胞及3T3-F442A细胞结合特异性研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 JAK-STAT信号转导通路验证猪生长激素模拟肽活性的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 MAPK-ERK信号转导通路验证猪生长激素模拟肽活性的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 主要英文缩写 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（8）IGF-Ⅰ及受体基因mRNA在不同发育时期鹅肌肉组织中表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 IGF-Ⅰ基因的研究进展 |
| 1.1.1 IGF-Ⅰ基因的发现 |
| 1.1.2 IGF-Ⅰ基因的作用机理 |
| 1.1.3 IGF-Ⅰ基因的调控 |
| 1.1.4 IGF-Ⅰ基因的生物学功能 |
| 1.1.5 IGF-ⅠR的生物学特性 |
| 1.2 实时荧光定量PCR技术的原理以及在科研中的应用 |
| 1.2.1 实时定量PCR技术的原理 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR的解析方法 |
| 1.2.3 存在的问题及应用前景 |
| 第二章 研究内容 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）版纳微型猪近交系生长相关基因遗传背景分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 动物生长发育的调控机制 |
| 第2章 影响猪生长发育相关因子及基因的研究进展 |
| 2.1 生长激素 |
| 2.1.1 生长激素的结构 |
| 2.1.2 生长激素的功能 |
| 2.1.3 生长激素的分泌和作用方式 |
| 2.1.4 生长激素的基因及多态性 |
| 2.2 生长激素受体 |
| 2.2.1 生长激素受体的结构 |
| 2.2.2 生长激素受体与信号转导 |
| 2.2.3 生长激素受体基因与表达 |
| 2.3 垂体特异性转录因子 |
| 2.3.1 垂体转录因子的结构与功能 |
| 2.3.2 垂体转录因子的基因与多态性 |
| 2.4 生长抑素 |
| 2.5 生长素 |
| 第3章 国内外小型猪资源 |
| 3.1 中国小型猪的品种及分布 |
| 3.2 国外主要小型猪 |
| 3.3 版纳微型猪 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 猪种间血清 GH 及 IGF-1 的含量差异分析 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.3 讨论 |
| 第二章 猪主要生长相关基因的结构基因组学研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 猪 GH、GHR 及 IGF-1 基因部分组织表达差异分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 版纳微型猪 GH 及 GHR 基因的克隆表达及功能分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（10）广西巴马小型猪生长轴关键基因研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 常用缩写词中英文对照 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 动物生长性状的遗传学概述 |
| 1.2 生长性状相关基因研究 |
| 1.3 广西巴马小型猪 |
| 1.4 本研究的意义 |
| 第二章 广西巴马小型猪及长白猪血清GHR、IGF-I的测定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果与分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 三个品种猪SS、GH、JAK2、IGF-I基因多态性研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 三个品种猪群体遗传学分析 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 GHR基因CDS克隆及其真核表达载体的构建 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 肝脏GHR、JAK2、IGF-I基因的表达研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 试验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录1 SS基因HRM检测图谱 |
| 附录2 GH基因HRM检测图谱 |
| 附录3 JAK2基因HRM检测图谱 |
| 附录4 IGF-I基因HRM检测图谱 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
四、重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响（论文参考文献）
- [1]藏猪和大约克猪脂肪组织代谢模式探索分析[D]. 王珍梅. 西藏农牧学院, 2021
- [2]营养因子对瘦素及其受体基因表达的影响[J]. 高铎,魏婧雅,孙鹏. 华北农学报, 2019(S1)
- [3]藏猪IGF-1成熟肽cDNA的克隆表达及活性分析[D]. 张飞燕. 四川农业大学, 2017(01)
- [4]整合转录组及全基因组重测序方法鉴定影响猪脂肪沉积的关键基因及其变异[D]. 邢凯. 中国农业大学, 2015(08)
- [5]SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测转双基因猪pGH基因与IGF-1基因的表达[J]. 胡义洁,吴明明,朱艳菲,孙金海. 中国畜牧杂志, 2014(13)
- [6]不同日粮对长白猪和巴马香猪细胞因子与激素水平的影响[D]. 何凌云. 湖南农业大学, 2014(09)
- [7]猪生长激素模拟肽对鼠细胞中生长激素受体相关信号转导通路的影响[D]. 李维. 吉林农业大学, 2013(05)
- [8]IGF-Ⅰ及受体基因mRNA在不同发育时期鹅肌肉组织中表达的研究[D]. 郝哲. 吉林农业大学, 2012(06)
- [9]版纳微型猪近交系生长相关基因遗传背景分析[D]. 邓景致. 吉林大学, 2012(09)
- [10]广西巴马小型猪生长轴关键基因研究[D]. 吴丹. 广西大学, 2012(03)