一、靶向治疗用Fe_3O_4 及其白蛋白包被磁性纳米粒子的制备(英文)（论文文献综述）
林靓茹[1]（2021）在《生物膜包被的铁纳米粒子通过免疫激活和铁死亡协同抗肿瘤》文中研究说明恶性肿瘤是一种免疫和代谢失衡疾病,通过开发针对肿瘤免疫和代谢的新型疗法有助于在杀伤肿瘤细胞的同时避免对正常细胞的损害,实现恶性肿瘤的高效低毒治疗。细菌膜中包含的微生物来源的组分可以有效激活机体先天免疫系统,因此利用基于细菌膜的免疫疗法可以为实体瘤的有效治疗带来新的思路。此外,异常增殖的肿瘤细胞对铁的需求高于正常细胞,这种对铁的依赖使得肿瘤细胞更容易发生铁代谢相关的死亡。基于此,本研究构建了一种细菌生物铁矿化生成生物膜包被的铁纳米颗粒,并评估了这种多功能的生物纳米材料诱导的机体免疫反应激活和肿瘤细胞铁死亡的联合抗肿瘤效果。（一）生物膜包被的铁纳米颗粒的制备及表征本研究利用了细菌内在的氧化还原反应合成了大肠杆菌包被的Fe3O4纳米颗粒,首先通过透色电子显微镜和能谱元素分析细菌培养过程中铁离子的价态、浓度和共孵育时间对铁纳米颗粒生成的影响,优化细菌生成铁纳米颗粒的条件。最终确定使用终浓度为200 m M的二价铁离子培养液和细菌共孵育22小时,可在细菌膜上观察到粒径均一的铁纳米颗粒,粒径约为10 nm。随后依次制备出了灭活的铁矿化大肠杆菌,铁矿化大肠杆菌菌影,铁矿化大肠杆菌内膜,铁矿化大肠杆菌内膜包被的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（Poly-Lactic-co-Glycolic Acid,PLGA）,铁矿化金黄色葡萄球菌以及铁矿化金黄色葡萄球菌膜囊泡（Membrane vesicles,MV）。最后出于对生物安全性和多功能性的考虑,选择通过提取含有铁纳米颗粒的细菌内膜,用其包裹PLGA纳米颗粒,制备出含有铁和细菌内膜的多功能纳米颗粒（PLGA@E coli inner membrane-Fe3O4,PEF）。电镜结果显示PEF尺寸均一分散良好,没有聚集现象,外壳有黑色衬度,为黑色Fe3O4纳米颗粒。动态光散射结果表明,PEF粒径约为110 nm,电位约为-29.0 m V。在成功构建PEF后,本研究还制备了Fe3O4纳米颗粒（Fe3O4Nanoparticles,FN）以及修饰有Fe3O4的脂质体包被PLGA的纳米颗粒PLF（PLGA@Liposome-Fe3O4）,作为后续体内外研究的对照组。（二）PEF诱导先天免疫激活和铁死亡及其抗肿瘤效果评估本研究首先从体外水平评估了PEF诱导先天免疫激活和铁死亡的能力。将PEF和骨髓来源的树突状细胞（Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDCs）共孵育,可以观察到大量负载有荧光染料的PEF被BMDCs摄取,同时,细胞培养上清中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL12共五种细胞因子的分泌水平上升,BMDCs共刺激因子CD80和CD86表达上升,证明PEF可以被树突状细胞有效摄取并诱导先天免疫反应,促进DC细胞分泌促炎细胞因子和成熟。细胞毒实验结果显示PEF具有诱导肿瘤细胞死亡的效果,Western Blot结果也显示出GPx4和FACL4这两种铁死亡特征蛋白表达下调,侧面验证了铁死亡的发生。进一步地,我们构建了CT26结直肠癌荷瘤小鼠模型,以探索PEF的抗肿瘤治疗效果。结果显示当PEF为150 mg/kg（铁含量为0.8 mg/kg）时,对肿瘤细胞的杀伤效果最好。本研究还分析了PEF的协同抗肿瘤能力,实验结果表明,相较于单独诱导先天性免疫治疗组EF,单独铁代谢调控组FN以及PLF,PEF组的肿瘤治疗效果最好。H&E染色结果也显示,PEF组肿瘤部位坏死程度最高,初步证明了PEF调控先天免疫和铁代谢在肿瘤治疗的协同作用。同时,本研究还对PEF的生物安全性进行了评估,结果表明PEF对小鼠体重,脏器病理生理状态,血清中ALT,AST,BUN,CREA等肝肾功能指标以及小鼠的炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IFN-β等分泌均无明显影响,说明PEF具有良好的生物安全性。综上所述,本研究成功构建了一种含有细菌内膜和铁纳米颗粒的多功能纳米颗粒用于抗肿瘤治疗研究。一方面可以通过激活机体产生先天免疫反应,促进抗肿瘤效果;另一方面可以通过调节肿瘤细胞铁代谢,促进肿瘤细胞铁死亡。我们证明这种具有双重调控作用的新型纳米材料能够有效抑制肿瘤细胞生长,并具有良好的生物安全性,具备很好的临床应用潜力。
邵浦[2]（2020）在《Fe3O4@PDA磁靶向间充质干细胞治疗类风湿性关节炎的机制及其毒理学评价》文中认为类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）,是一种对称多发在人体小关节的慢性全身性自身免疫性疾病,早期临床表现包括关节红肿、疼痛、限制活动范围,晚期可能导致关节活动能力下降,甚至完全失去活动能力。其病理特征在于全身炎性因子的异常变化,使机体产生自主免疫,并促使局部关节滑膜的新生血管翳形成,导致关节滑膜的发炎、增生,最终使受损关节处的骨软骨慢性破坏。间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）作为一种具有高度分化能力的低免疫原性细胞,近年来在RA的治疗中展现了巨大的优势,既可以有效控制RA全身的炎症,也可以修复RA的骨软骨损伤。但由于其靶向性较差,也使得该疗法有一定的不足。Fe3O4纳米粒子是最常用的超顺磁性纳米粒子,利用MSCs的内吞作用将其进行磁性标记形成磁化细胞,并在受损关节局部放置磁场对其进行磁性引导可使得更多的MSCs在局部靶向富集,发挥治疗作用。与此同时,纳米粒子应用的潜在纳米毒性也是一个不容忽视的问题,在纳米材料的毒理学评价和减毒材料包被方面已经引起了更多学者的关注。研究表明,尽管经过聚多巴胺（poly dopamine,PDA）的包被的Fe3O4纳米粒子可有效减低其毒性,并且细胞膜生物功能化纳米粒子也成为目前最热门的纳米材料减毒包被的方法之一,但两种包被方法的功能对比研究亟待深入探讨,这可为寻找更好的生物相容性纳米材料提供理论基础。因此本研究主要分为以下两部分:一、Fe3O4@PDA磁靶向人脐带间充质干细胞对家兔类风湿性关节炎骨软骨缺损模型治疗的机制研究在本研究中,利用HUMSCs的内吞作用将Fe3O4@PDA进行磁性标记形成磁化细胞,通过家兔的耳缘静脉注射进家兔体内,并在受损关节局部磁性引导来治疗骨软骨缺损的家兔RA模型。将家兔分为以下8组,即（1）空白对照组（不致敏、不治疗）、（2）假手术组（不致敏、不治疗、仅切开皮肤后缝合皮肤）、（3）生理盐水治疗组、（4）Fe3O4@PDA治疗组、（5）Fe3O4@PDA+Magnet治疗组、（6）单纯HUMSCs治疗组、（7）Fe3O4@PDA+HUMSCs治疗组、（8）Fe3O4@PDA+HUMSCs+Magnet治疗组。应用大体外相观察、ICRS软骨修复的宏观评分、苏木素伊红（hematoxylin eosin staining,H&E）染色、ICRS视觉组织评分、甲苯胺蓝O（toluidine blue,TBO）染色,番红O-固绿染色、马松（Masson）三色法染色、家兔股骨髁MicroCT等方法对骨软骨修复情况进行检测。结果表明在4周、12周和24周,Fe3O4@PDA+HUMSCs+Magnet治疗组均获得了最好骨软骨结构形成及最高的评分,且随着时间的增加,修复效果越显着。应用ELISA、RT-PCR等方法分别对炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α,成骨因子OCN和OPN,成软骨因子SOX9、COLII和GAGs进行检测,结果表明在4周、12周和24周,Fe3O4@PDA+HUMSCs+Magnet治疗组的炎性因子表达最少、骨软骨修复效果最佳,且随着时间的增加,治疗效果越显着。表明磁靶向HUMSCs可为骨软骨缺损RA模型的治疗提供新的可行方案。二、基于PI3K/AKT/mTOR信号通路的三种磁性纳米颗粒对于小鼠肾脏组织的凋亡和自噬的毒性影响在本研究中,将HUMSCs膜囊泡与Fe3O4@PDA纳米粒子以聚合物与膜蛋白的重量比为2:1混合并通过挤压的方法获得了干细胞膜包被的Fe3O4@PDA,即MSC（Fe3O4@PDA）。然后制备Fe3+浓度为10mg/mL的Fe3O4、Fe3O4@PDA及MSC（Fe3O4@PDA）的悬浮液。选择体重（20±2）g的ICR小鼠,随机分为四组,即（1）生理盐水对照组,（2）Fe3O4暴露组、（3）Fe3O4@PDA暴露组和（4）MSC（Fe3O4@PDA）暴露组。按照45mg/kg.kw/d的Fe3+浓度剂量(1/10 LD50)将Fe3O4、Fe3O4@PDA及MSC（Fe3O4@PDA）的悬浮液连续4周注射进小鼠体内,最后处死小鼠后获得小鼠的肾脏组织。采用Tunel染色法观察肾脏凋亡,透射电子显微镜分析肾脏自噬,RT-qPCR和Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Blc-2、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9,自噬相关因子LC3、P62、Beclin-1和ATG5及凋亡和自噬的上游PI3K/AKT/mTOR信号通路的mRNA和蛋白表达。结果显示,MSC（Fe3O4@PDA）暴露组引起了最少量的肾脏细胞自噬和凋亡,且由PI3K/AKT/mTOR信号通路调控。以上结果表明人脐带间充质干细胞膜伪装的Fe3O4@PDA纳米粒子可降低肾毒性,为以后纳米材料更好的应用于医学领域提供新思路。
贺克武[3]（2020）在《pH响应性聚电解质包覆载药三氧化二钆@介孔二氧化硅纳米粒子在MRI示踪药物靶向治疗肝癌中的应用》文中研究指明肝癌最我国最常见的恶性肿瘤之一,占新发恶性肿瘤9.42%。当前,外科手术切除或消融治疗仍是治疗I a肝癌的首选治疗方法,但由于早期肿瘤发生的隐匿性,导致早期发现、早期诊断及早期治疗肝癌难以实现。对于中晚期肝癌,外科手术切除后5年复发率高达40%-70%,5年生存率低。对于不能外科手术切除的中晚期肝癌,可选择肝动脉栓塞化疗、消融、FOFOX4全身化疗及索拉菲尼分子靶向药物治疗、外放射治疗或125I粒子组织间内放射治疗、免疫治疗等治疗方法。其中化疗是肝癌重要的治疗手段之一,但由于传统的小分子化疗药物的局限性,如化疗药的毒副作用限制了肿瘤治疗的有效剂量,肿瘤干细胞化疗逃逸,加之肿瘤组织微环境内缺氧和酸中毒、间质高压形成,导致药物不能有效渗透至肿瘤内部等原因致使肝癌化疗效果较差,毒副作用较严重。因此,开发一种具有主动靶向性,高效肿瘤细胞杀伤作用,低毒副作用,并具有实时监测药物的分布、代谢和疗效,兼具诊断功能的诊疗一体化载药体系成为当前研究热点之一。基于上述需求,本课题第一章设计和制备了一种具有肝癌细胞药物靶向递送、MRI对比增强、癌细胞微环境可控性药物释放的诊疗一体化多功能杂化介孔二氧化硅纳米粒子 FA-Gd2O3@MSN-DOX。使用透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）、扫描电镜（scanning electron microscopy,SEM）、X 射线衍射仪（x-ray diffractometer,XRD）、全自动微孔物理吸附和化学吸附分析仪、核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）波谱仪,傅里叶变换红外光谱（fourier transform infrared,FT-IR）、热重分析仪（thermogravimetric analyzer,TGA）、荧光分光度计、粒子分析仪、电感耦合等离子发射光谱仪、双光束UV/Vis分光光度计等多种方法对FA-Gd2O3@MSN-DOX进行了表征。合成的FA-Gd2O3@MSN-DOX为球形,平均粒径约为50nm,纳米粒子比表面积为862.2 m2/g,介孔规则有序,孔直径约为3.8nm,介孔内DOX负载量约为4.2wt%,介孔壁上负载的Gd2O3纳米粒子含量为2.6wt%,在弱酸性溶液中,纳米粒子表面采用LBL方法包覆的多层聚合物TPAMA/PAH降解并释放介孔内携载的抗癌药物DOX,且其释放药物的速度随着pH值的降低而加快。随着DOX的释放,水分子进入介孔内,在介孔壁上磁性Gd2O3纳米粒子的作用下,产生T1WI强化作用。其中,Gd2O3@MSN-NH2弛豫率约为DTPA-Gd的三倍,而包覆多层聚合物膜之后的Gd2O3@MSN弛豫率降低,略低于DTPA-Gd,利用弱酸降解包覆的聚合物后,MRI信号强度逐渐恢复到高值,表现出了良好的pH感应性和T1成像能力。本课题第二章,体外细胞毒性结果显示未载DOX的Gd2O3@MSN及FA-Gd2O3@MSN无论对HepG2细胞及其他癌细胞还是正常细胞均没有毒性,而载 DOX 的 FA-Gd2O3@MSN-DOX 和 Gd2O3@MSN-DOX 纳米粒子组对 HepG2 细胞及其他癌细胞具有明显的细胞毒性,且FA-Gd2O3@MSN-DOX细胞毒性作用较Gd2O3@MSN-DOX更强,但二者对正常细胞的毒性均较小,提示该体系具有较小的全身毒性从而有益于其生物医学应用。Gd2O3@MSN和FA-Gd2O3@MSN-DOX对 HepG2 细胞、Hela 细胞、A549 细胞半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）分别约为:52/3 0μg/mL、11/4μg/mL、119/93 μg/mL。该结果的差异可能是由于不同的肿瘤细胞摄取纳米粒子效率不同,FA-Gd2O3@MSN-DOX由于癌细胞叶酸受体的介导作用表现出更高的细胞内化性能。细胞凋亡实验进一步证实了不载DOX的Gd2O3@MSN及FA-Gd2O3@MSN组细胞凋亡率与对照组比较在纳米粒子与细胞孵育12h、24h及48h各个时间点均无显着差异（P<0.05）。载 DOX 的 FA-Gd2O3@MSN-DOX 和 Gd2O3@MSN-DOX随纳米粒子与肿瘤细胞孵育时间的延长肿瘤细胞凋亡率逐渐增加,在共孵育48小时后 Gd2O3@MSN-DOX 组平均凋亡率为（29.3133±0.67026）%,FA-Gd2O3@MSN-DOX组平均凋亡率为（42.9100±6.22820）%,凋亡率明显高于对照组及不载DOX的Gd2O3@MSN和FA-Gd2O3@MSN组（P<0.01）。激光共聚焦显微镜证实了 FA-Gd2O3@MSN-DOX及Gd2O3@MSN-DOX跨膜进入细胞后主要分布于癌细胞的溶酶体内。随着纳米粒子与癌细胞孵育时间的延长,摄入细胞内的FA-Gd2O3@MSN-DOX或Gd2O3@MSN-DOX在溶酶体内的聚集呈现差异,FA-Gd2O3@MSN-DOX呈持续性增高,Gd2O3@MSN-DOX在前24小时内呈上升趋势,其后呈下降趋势,这归因于前者是叶酸介导的主动靶向进入细胞,后者依靠被动靶向进入细胞,进入细胞内的纳米粒子量主要取决于细胞内外纳米粒子的浓度梯度。进一步观察游离的DOX在细胞内分布可见游离DOX进入细胞后呈弥散分布,可见细胞核内有大量DOX,而不是仅局限于溶酶体内,这归因于小分子的游离DOX主要以扩散的方式跨膜进入细胞。通过激光扫描共聚焦荧光寿命成像,证实了 DOX在细胞内随时间延长可逐渐从纳米粒子内释放出来,从负载状态的长荧光寿命变为游离状态的短荧光寿命,从而发挥肿瘤细胞杀伤作用。通过Western Blot检测在分子水平上证实了 FA-Gd2O3@MSN-DOX可抑制肿瘤细胞自噬,阻断自噬流,从而导致细胞凋亡。细胞电镜从亚细胞形态学上进一步证实FA-Gd2O3@MSN-DOX及Gd2O3@MSN-DOX可抑制肿瘤细胞自噬,阻断自噬流,细胞浆内自噬溶酶体明显增多,增大。另外,体外细胞核磁共振结果显示HepG2细胞分别与不同浓度的FA-Gd2O3@MSN、Gd2O3@MSN和Gd-DTPA孵育48小时后,FA-Gd2O3@MSN组具有最高信噪比（SNR）,其次是Gd2O3@MSN组,Gd-DTPA组的信噪比最低。本章结果表明合成的FA-Gd2O3@MSN-DOX对HepG2肝癌细胞具有靶向递送、肿瘤内环境pH感应性释放携载抗癌药物DOX,并具有高效杀伤肿瘤细胞的作用,随着DOX的释放,MRI对比增强效果逐渐增加,具有潜在实时监测药物递送、释放、分布及疗效的功能,充分展示了其具有诊疗一体化的效能。本课题第三章,通过活体动物实验研究了 FA-Gd2O3@MSN-DOX在体内的分布、代谢和清除过程,FA-Gd2O3@MSN-DOX经尾静脉注射后,主要分布于肺部、肝脏和肾脏,随着时间的延长,上述脏器脏器内的DOX荧光信号逐渐减弱,注射72小时后除肺部残留少许DOX荧光信号,肝脏和肾脏的DOX荧光信号基本消失。在注射药物后的0.5h和6h胃肠道内的DOX荧光信号明显增加,其后荧光信号维持在较高水平。脾脏和心脏内未见明显荧光信号。值得注意的是在注射药物12h时,胆囊内可见较强的荧光信号。这一结果提示FA-Gd2O3@MSN-DOX经静脉注射后,主要的代谢途径为肾脏和肝脏单核吞噬细胞系统以及胆汁-消化道途径。病理学上体内主要脏器也没有的组织结构的破坏。生物安全性实验结果表明经静脉注射FA-Gd2O3@MSN-DOX对血常规和肝肾功能没有明显影响,显示了良好的生物相容性和生物安全性。经瘤内给药,FA-Gd2O3@MSN-DOX可在瘤体内弥散,并最终杀伤肝癌细胞,且FA-Gd2O3@MSN-DOX效果高于Gd2O3@MSN-DOX,这一结果表明,FA-Gd2O3@MSN-DOX具有良好的肝癌细胞主动靶向性和良好的肿瘤细胞杀伤作用。MRI扫描显示FA-Gd2O3@MSN在瘤内注射1周内,T1WI信号强度逐渐增加,表明其具有良好的瘤组织内弥散作用和靶向作用,可用于检测负载药物的分布、释放和实时监测疗效。总之,本课题成功合成了肿瘤微环境响应性FA-Gd2O3@MSN-DOX诊疗一体化体系,可主动靶向肝癌细胞,并利用癌细胞溶酶体弱酸环境降解包覆的pH响应聚合物,释放负载的DOX杀伤肿瘤细胞,水分子进入介孔内,引起MRI T1WI强化作用,可用于实时监测携载药物在肿瘤病灶内的分布、代谢和疗效,兼具MRI对比增强作用。
徐志明[4]（2019）在《蛋白质仿生纳米药物用于原位骨肿瘤及淋巴结转移的诊疗研究》文中指出恶性肿瘤是严重危及人类生命健康的疾病。世界卫生组织（world health organization,WHO）统计表明其发病率呈现增高的趋势,并预测2030年全球癌症致死人数将达到1310万,所以,癌症成为威胁当今全球人类健康的严重问题。如何实现高灵敏、高分辨的肿瘤影像诊断为肿瘤治疗提供有效信息是目前癌症治疗的一大难题。纳米材料由于其独特的尺寸以及物理化学性质,在癌症的成像和治疗上有着很大的应用潜力。一方面,许多纳米材料具有的光学、磁学、声学等物理性质,可以被用于生物医学成像。另一方面,纳米材料被广泛地用作药物载体,以实现药物在肿瘤区域的被动靶向和主动靶向,提高药物在肿瘤病灶部位的局部浓度并降低在其它器官中的分布,从而增强药效并减少毒性。与此同时,纳米材料的一些特殊的物理性质,如光吸收、电磁波吸收的能力以及超顺磁性也能用于构建一些新型的癌症诊疗平台,如光热疗法、光动力学疗法、电磁波疗法、磁热疗法等,近年来也在动物实验或临床研究中显示出很好的应用前景。本论文主要针对肿瘤的高效精准诊断与治疗,利用蛋白质仿生矿化或组装策略构建蛋白质仿生纳米药物,探索蛋白质仿生纳米药物的肿瘤靶向成像、淋巴转移监测及活体分布分析,从而利用非侵入式的成像和治疗方式,实现恶性肿瘤的精准诊断与治疗。第一部分:基于99mTc与近红外染料标记的血清蛋白仿生氧化钆纳米药物用于原位骨肿瘤及其淋巴转移的多模态成像。利用化学共价偶联法与配位法,我们将近红外小分子Cypate与放射性金属核素99mTc标记于血清蛋白稳定的Gd2O3纳米粒子表面,构建了一种集MRI、近红外荧光与单光子发射断层扫描成像（single photon emission computed tomography,SPECT）于一体的多模态纳米药物,实现了原位骨肉瘤与转移前哨淋巴结的多模态成像分析,该工作为肿瘤与前哨淋巴结的精准定位提供了依据。第二部分:活体光声/单光子发射计算机断层成像动态监控聚集增强的蛋白质仿生光热纳米药物。诊疗一体化纳米试剂整合诊断与治疗功能,在影像导航的肿瘤治疗以实现高效精准诊疗方面具有潜在的应用价值。理解诊疗试剂的活体动态过程包括吸收、分布、代谢及清除等,对于优化设计生物安全的诊疗试剂与高效治疗计划是十分重要的。利用疏水性近红外荧光染料诱导蛋白质自组装策略,构建了一种基于丝素蛋白与近红外染料Cypate的组装纳米诊疗试剂,具有良好的化学稳定性与生物安全性。将放射性核素99mTc标记于纳米试剂表面后,采用SPECT与三维光声成像技术研究了该纳米试剂的活体吸收、分布、代谢及清除等动态过程。由于Cypate的高度聚集状态,其近红外荧光被猝灭,而该纳米药物表现较强的近红外光吸收效率和较高的光热转换效率,因而也具有灵敏的光声成像性能。该研究对非侵入性可视化分析纳米药物的活体分布及代谢行为、肿瘤靶向性能及治疗计划等极具指导意义。
刘雯[5]（2019）在《刺激响应型仿生纳米药物载体设计及其肿瘤联合治疗的研究》文中指出癌症已成为全球第二大人类致死病因。然而,大多数常规化学治疗仍然存在严重的副作用。近几十年来,工程纳米治疗剂的开发和应用在癌症治疗等方面取得了显着进展。随着对肿瘤微环境和材料科学的深入了解,能够响应各种内、外部刺激源,按需释放有效载荷的智能响应型纳米药物载体成为新一代纳米药物运输体系的新工程策略。基于智能纳米药物体系的优异性,本论文围绕完善功能化纳米载体设计,提高肿瘤治疗效果以及减少毒副作用这一目标,选择了具有良好生物相容性的生物大分子牛血清白蛋白、红细胞膜以及天然葡萄糖氧化酶（GOx）为纳米载体,设计了具有p H和谷胱甘肽（GSH）双重响应、光触发释放以及酶催化响应的三种纳米药物递送系统,用于药物在肿瘤部位的定点和响应性释放,实现了肿瘤靶向、实时跟踪、多功能治疗等作用。主要研究工作如下:（1）首先介绍了刺激响应型纳米药物递送系统在肿瘤治疗中的发展历程及现状,并在此基础上提出了工作设想。第二章,为了提高纳米药物在肿瘤部位的高效递送,我们制备了“动态共价靶向”的纳米系统用于靶标处的响应性药物释放。在受体介导的内吞作用下纳米系统实现细胞内化后,在细胞内还原和酸性环境下解离成阳离子白蛋白,实现药物的刺激响应型释放。负载DOX和VEGF-si RNA的纳米系统表现出高效的基因沉默能力和凋亡诱导能力,并且能显着抑制癌细胞的迁移和侵袭,显示出对肿瘤生长的组合抑制效应。尽管白蛋白智能纳米系统在肿瘤治疗中取得较好的效果,但是这种纳米粒子在运输途中将不可避免的泄露。（2）为了解决这一问题,在第三章中,我们引入了红细胞膜对载体进行伪装,保留了完整细胞膜结构和膜蛋白的红细胞膜伪装的纳米粒子具有血液循环时间长和免疫逃逸等优异的细胞特异性功能,为药物输送提供了一个很有前途的药物纳米平台。我们将包封有二氯（1,2-环己二胺）铂（DACHPt）和吲哚菁绿（ICG）的牛血清蛋白进一步包埋在靶向多肽修饰的红细胞膜中（R-RBC@BPt I）,构建了一种新颖的具有肿瘤靶向能力的红细胞膜仿生联合治疗体系,用于延长药物在体内的循环时间、增强肿瘤内化、光热疗法和化学疗法的协同治疗。具有肿瘤特异性靶向的R-RBC@BPt I在光触发下通过光动力/光热和化学疗法的联合治疗实现了肿瘤的全面消融以及体内肺转移的抑制。虽然在第三章的研究中,我们已经取得了较好的肿瘤治疗效果,但是化疗药物和光热疗法仍然不可避免的会带来一些不利影响。（3）因此,我们进一步设计了一种“二酶合一”的肿瘤靶向仿生级联递送系统,希望能够在原位释放纳米酶进行化学动力学治疗,以提高癌症治疗效率并减少毒副作用。通过将超小型铁纳米颗粒锚定在葡萄糖氧化酶的内腔中,然后将他们和光敏试剂ICG嵌入肿瘤靶向配体Angiopep-2功能化的红细胞膜中。在靶向配体介导的内吞作用下我们的仿生纳米催化系统将优先累计在靶肿瘤位点。基于肿瘤部位高葡萄糖摄取和弱酸性环境,GOx将肿瘤部位的葡萄糖转化为过氧化氢（H2O2）,用于诱导铁纳米颗粒启动原位芬顿反应。顺序催化后产生活性最高的活性氧物质羟基自由基,通过诱导肿瘤细胞氧化损伤,杀死肿瘤细胞。在第四章中我们对全文进行了总结,并对未来的工作进行了探讨和展望。本论文为肿瘤的靶向治疗、刺激响应型纳米粒子的构建以及减少药物毒副作用提供了解决思路。
张水花[6]（2019）在《多功能磁性纳米粒子的制备及其在动脉粥样硬化诊疗中的应用》文中指出·第一章:RAP@PFN1-CD-MNPs纳米载药体系的制备目的:本章围绕实现动脉粥样硬化诊疗一体化为目标,成功构建多功能纳米载药体系RAP@PFN1-CD-MNPs。在细胞、蛋白水平上进行一系列生物活性研究,探讨RAP@PFN1-CD-MNPs纳米体系的生物相容性及体外药物释放。材料与方法:①以环糊精为载体,装载雷帕霉素（RAP）以及超小超顺磁性氧化铁（USPIO）,并通过共轭profilin-1抗体修饰,制备出RAP@PFN1-CD-MNPs多功能型纳米载药体系。②应用透射电子显微镜、Nano-ZS型纳米粒度仪、傅里叶变换红外光谱仪以及紫外吸收光谱等观察分析其表征、形貌、粒度、Zeta电位及结构等。③通过药物释放分析载药量、包封率及不同环境下纳米药物的控释。④利用红细胞溶血实验评价其血液相容性;细胞吸收实验及CCK法等方法分析RAP@PFN1-CD-MNPs对鼠主动脉血管平滑肌细胞（MOVAs）的体外靶向效果和生物相容性。⑤Western blotting检测分析profilin-1的表达。结果:①纳米颗粒在干燥状态下呈均匀的尺寸分布和单分散球形形态,平均粒径为15-30 nm,颗粒带有18.37 mV的正zeta电位;②饱和磁化强度（Ms）为69.85 emu/g,呈顺磁性;③RAP@PFN1-CD-MNPs纳米颗粒中的RAP载药含量（Drug loading content,LC）可达87%,RAP@PFN1-CD-MNPs的水解与缓冲溶液的pH有关,pH值越低,在相同的时间点,纳米粒子水解速度越快;④与不同浓度PFN1-CD-MNPs共同孵育后,小鼠红细胞（MRBCs）未发现明显的溶血现象;⑤纳米载体与MOVAS共培养1天、3天和7天,随着培养时间的延长,细胞毒性略有增加,在培养三天后,细胞存活率仍在80%以上;⑥MOVAS的体外荧光成像及普鲁士蓝结果显示PFN1-CD-MNPs与MOVAS的细胞结合度较高。结论:本研究成功构建的PFN1-CD-MNPs多功能纳米体系,可以作为优良的MRI T2阴性对比剂;PFN1-CD-MNPs纳米载药体系具有良好的稳定性,血液相容性、生物相容性及酸性环境响应能力;结合profilin-1抗体的纳米体系在体外对MOVAS具有良好的靶向效果。第二章:PFN1-CD-MNPs-Cy5.5纳米体系体内外双模态成像研究目的:通过体内MR成像及近红外荧光成像研究PFN1-CD-MNPs-Cy5.5纳米体系在体内的分布及靶向动脉粥样硬化斑块的成像效果。材料与方法:①通过体外MR成像测量不同浓度纳米粒子的弛豫时间及成像效果;②利用近红外荧光成像（NIRF）探测PFN1-CD-MNPs在体内各组织器官的分布;③载脂蛋白E缺陷（ApoE-/-）小鼠通过高脂饮食构建动脉粥样硬化模型并测定其血清血脂谱改变;④Western blot分析动脉粥样硬化斑块的profilin-1表达;⑤利用7.0T小动物磁共振成像系统进行体内颈动脉粥样硬化斑块的MR成像;⑥利用近红外荧光成像进行离体主动脉斑块成像;⑦普鲁士蓝病理学分析验证纳米粒子的组织分布结果:①计算纳米粒子的横向弛豫率（r2）为90.3 mM-1 s-1,符合MRI阴性对比剂要求;②PFN1-CD-MNPs在血液中的循环时间相对较长,注射72h后,铁在肝脏和脾脏中沉积相对较多;③高脂饮食四个月成功构建ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,油红O（ORO）大体染色及H&E染色均证实动脉粥样硬化斑块的存在;④与正常对照组相比,ApoE-/-组HDL-C、LDL-C和TC水平显着升高,高脂饮食7个月时血清TC和脂蛋白水平高于4个月时;⑤与C57BL/6正常组相比,ApoE-/-组动脉壁上的profilin-1蛋白表达明显增高;⑥与注射前相比,注射PFN1-CD-MNPs 24h后的ApoE-/-小鼠颈动脉MR成像提示明显的T2加权信号衰减,而CD-MNPs组中颈动脉壁几乎没有信号变化,具有统计学意义;⑦与CD-MNPs-Cy5.5注射组相比,PFN1-CD-MNPs-Cy5.5注射组主动脉的荧光信号明显增高,具有统计学意义。结论:PFN1-CD-MNPs被网状内皮系统摄取相对增多;高脂饮食4个月可成功构建动脉粥样硬化模型,随着高脂饮食的时间延长,血脂水平逐渐升高;通过MRI及NIRF可实现体内外动脉斑块成像;profilin-1蛋白在动脉硬化斑块区高表达,与PFN1抗体分子偶联的纳米颗粒对动脉粥样硬化斑块具有更精准的靶向效果。第三章:RAP@PFN1-CD-MNPs纳米体系体内抗动脉粥样硬化疗效研究目的:通过离体主动脉荧光成像、血液生化指标以及免疫组织化学等方法,进一步深入评估RAP@PFN1-CD-MNPs多功能纳米载药体系的安全性以及动脉粥样硬化的干预效果。材料与方法:①通过高脂喂食8周后随机分3组并分别给与靶向纳米药物、非靶向纳米药物及生理盐水不同干预,同时继续高脂喂食至16周;②通过离体荧光成像、油红染色观察不同组间的主动脉斑块病变范围;③对不同组的ApoE-/-小鼠主动脉进行Masson三色染色及免疫组织化学分析,通过分析斑块胶原相对含量、CD68相对含量及α-SMA的相对含量,进一步评估药物治疗后斑块的稳定性;④通过观察主要脏器的H&E染色及血液生化指标,评估RAP@PFN1-CD-MNPs纳米体系的体内潜在毒性。结果:①主动脉离体荧光成像显示RAP@PFN1-CD-MNPs干预组荧光信号最弱,生理盐水对照组信号最强;②ORO主动脉染色的体式显微成像中观察到生理盐水对照组中主动脉斑块面积最广泛;③用RAP@PFN1-CD-MNPs干预后,ORO染色显示主动脉斑块面积减少,以主动脉弓横断面的减少更为显着,差异具有统计学意义;④Masson三色染色显示载药纳米体系干预后,斑块周围胶原相对含量增加,且RAP@PFN1-CD-MNPs组显着增加;⑤根据免疫组织化学染色结果,在雷帕霉素纳米体系组中CD68的相对含量减低和α-SMA相对含量增加;⑥H&E显示ApoE-/-小鼠的非靶器官没有明显器质性损伤,而RAP@CD-MNPs组的肾功能指标（肌酐（CREA）、尿酸（UA））和心功能指标（肌酸激酶（CK））显着高于对照组和RAP@PFN1-CD-MNPs组;⑦血脂指标（CHOL、HDL、LDL-C和TG）在对照组和纳米药物组（RAP@CD-MNPs和RAP@PFN1-CD-MNPs组）之间无显着差异。结论:通过腹腔内给予RAP@PFN1-CD-MNPs的干预明显延缓了斑块的发展,病变面积明显减少;与RAP@-CD-MNPs相比,RAP@PFN1-CD-MNPs可以更有效地缓解动脉粥样硬化的发展;雷帕霉素通过减少巨噬细胞以及增加斑块中的SMCs来发挥其稳定斑块的作用;在长期治疗中,RAP@PFN1-CD-MNPs纳米系统未发现明确的心肾功能损伤;雷帕霉素在不改变血清脂质水平的情况下有效地减轻炎症、抑制斑块进展和增强动脉粥样硬化斑块的稳定性;本研究合成的RAP@PFN1-CD-MNPs纳米系统没有表现出明显的副作用,因此它是一种用于干预动脉粥样硬化疾病相对安全的多功能纳米系统。
万国运[7]（2019）在《纳米红细胞治疗体系联合光热/光动力与化疗对乳腺癌的协同作用研究》文中认为研究背景和目的:乳腺癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一。目前,临床上乳腺癌的主要治疗手段包括手术治疗、化疗、放疗、内分泌治疗和免疫治疗等。然而,传统疗法都存在各自的缺陷,急需开发新的治疗手段治疗乳腺癌。光学疗法是一种新兴的肿瘤治疗方法,包括光热治疗（PTT）和光动力治疗（PDT）两种形式。PTT是利用光敏剂将近红外激光的光能转换成热能,造成肿瘤细胞热死亡的一种治疗方法。PDT是光敏剂在近红外激光的作用下,与肿瘤部位的氧气相互作用,产生大量活性氧自由基,通过直接杀伤肿瘤细胞和间接作用于肿瘤微环境来治疗肿瘤的方法。光学疗法具有易聚焦、微创及不易产生耐药等优势,在肿瘤治疗中表现出较好的应用前景。本文以红细胞为载体材料,设计并构建了一种结构简单并高效整合PTT/PDT与化疗的仿生纳米红细胞治疗体系（DIRAs）。该治疗体系是利用光敏剂吲哚菁绿（ICG）和化疗药物阿霉素（DOX）在气体发生剂碳酸氢氨（ABC）溶液中通过疏水与π-π共轭相互作用形成纳米复合物,然后利用红细胞（RBCs）对该纳米复合物进行包裹,同时实现纳米化制备而得。本课题还系统研究了纳米化红细胞对ICG、DOX和ABC的高效共载、热响应性药物爆破释放、血红蛋白（Hb）携氧增效光动力作用,以及联合PTT/PDT和化疗治疗乳腺癌的疗效及其相关机制。实验方法:1.在ABC溶液中与探头超声下,ICG与DOX通过分子间相互作用形成纳米复合物（ICG/DOX）,而后采用挤出法实现RBCs对ICG/DOX的包覆,制备纳米红细胞治疗体系DIRAs。运用透射电子显微镜（TEM）和动态光散射（DLS）考察DIRAs的形貌、粒径、Zeta电位及其体外稳定性;采用全蛋白图谱分析技术对其蛋白组分特征进行考察;利用血红蛋白测定仪检测DIRAs携载Hb的情况。2.采用红外热成像照相机监测激光照射过程中DIRAs溶液温度的变化;采用热重分析和凝胶实验考察ABC的热响应性产气性能;利用TEM观察激光照射后DIRAs形貌的变化;运用动态透析法和超高效液相色谱法对DIRAs的热响应性药物释放行为进行监测。3.采用紫外分光光谱法检测激光照射过程中Hb分子中的氧气消耗情况;以单线态氧荧光探针SOSG检测DIRAs溶液中活性氧的生成情况。4.运用CCK-8法评价不同给药治疗对乳腺癌4T1细胞的杀伤作用和长效抑制效应;利用激光共聚焦显微镜观察不同给药组细胞内的药物分布、活性氧生成、线粒体损伤及细胞色素C（Cyt c）的亚细胞定位情况;采用流式细胞技术定量检测不同给药组细胞的药物摄取、活性氧产生以及细胞凋亡情况;采用死活细胞染色法观察不同给药治疗对4T1细胞的杀伤作用;采用Western blotting实验检测线粒体凋亡通路中关键蛋白的表达变化。5.建立乳腺癌皮下移植瘤模型,通过肿瘤局部注射途径给药,而后利用小动物活体成像技术考察DIRAs在肿瘤病灶的滞留情况;给药1 h后对肿瘤进行激光照射,期间利用红外热成像照相机监测肿瘤部位的温度变化;治疗后取小鼠肿瘤制作冰冻切片,并采用SOSG荧光探针法检测肿瘤组织中活性氧的产生情况。6.对荷瘤小鼠随机分组并进行不同给药治疗,期间测量肿瘤尺寸,绘制肿瘤生长曲线,同时观察肿瘤的复发情况;治疗后对小鼠体内主要脏器与肿瘤进行苏木精-伊红（H&E）染色与组织病理学分析,考察各种治疗对肿瘤的杀伤作用以及对正常组织的损伤情况;采用生物发光和小动物活体成像技术考察各治疗组小鼠体内乳腺癌肺转移的情况。7.以健康小鼠为研究对象,采用静脉注射途径给药,然后利用血液分析仪对小鼠血液进行血常规分析;采用流式细胞技术检测小鼠脾脏中骨髓来源的抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）的比例;采用酶联免疫法（ELISA）对各给药组小鼠肝肾功能指标进行定量分析;对小鼠主要脏器进行H&E染色与组织病理学分析,考察脏器的损伤情况。研究结果:1.RBCs包裹ICG/DOX制备得到的纳米红细胞治疗体系DIRAs呈规则的球状形貌,粒径为97.9±21.3 nm,分散指数为0.203,Zeta电位为-21.6 mV。DIRAs表现出良好的体外稳定性,具有RBCs细胞膜和细胞质的特征蛋白组分,Hb的保留率约为52.7%。2.DIRAs保持了ICG良好的光热转化效率,激光照射过程中其溶液体系的温度高达60℃;DIRAs的光热效应能够触发ABC的热响应性分解,在其凝胶体系中观察到明显的气泡产生。TEM观察发现,激光照射后DIRAs的纳米结构发生破裂,并且部分药物从内部释出。激光照射下,DIRAs具有显着的热响应性爆破释药性能,并且药物的体外释放表现出一定的pH敏感性。3.DIRAs中的Hb以含氧形式存在,其携载的氧气可被ICG介导的PDT作用消耗,能够显着增加其溶液体系中活性氧的产量。4.在乳腺癌4T1细胞中,DIRAs表现出较强的入胞能力,高效携载DOX进入细胞核,并且激光照射能够进一步促进其入胞,DOX的入胞率提高了约30%。结合激光照射,DIRAs表现出极强的细胞毒性,显着诱导了4T1细胞的凋亡。与游离ICG比较,DIRAs不仅高效杀伤了激光照射区域内的细胞,还对照射区域外的细胞产生了明显的毒性。5.DIRAs结合激光照射促进了4T1细胞内ROS的产生,进一步造成线粒体损伤以及Cyt c由线粒体向细胞质的释放,同时线粒体凋亡通路下游关键蛋白Caspase 9/3被显着激活,证明DIRAs介导的PDT效应能够通过激活线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。6.在荷瘤小鼠体内,DIRAs明显延长了ICG与DOX在肿瘤部位的滞留时间,表现出显着优于游离ICG的PTT/PDT效应,促进了肿瘤局部温度升高,并增加了肿瘤组织中ROS的产量。7.DIRAs结合激光照射能够实现小鼠体内肿瘤的完全消融,造成肿瘤组织中大量细胞坏死,并在较长时间内抑制了肿瘤的复发和转移,进而延长了荷瘤小鼠的生存期。8.健康小鼠经不同给药治疗后,血常规各项参数、脾脏中MDSCs和肝肾功能各项指标均与阴性对照组无明显差异,组织切片染色未观察到各脏器出现病理学损伤,说明该纳米红细胞治疗体系具有较高的生物安全性。结论:本文成功制备了一种具有热响应性药物控制释放能力和携氧增效PDT作用的纳米红细胞治疗体系DIRAs,实现了PTT/PDT和化疗的有效联合及其对乳腺癌协同增效的治疗作用。体内外实验数据表明DIRAs有效阻止乳腺癌复发和转移,并具有良好的生物相容性,为临床乳腺癌开发新的治疗手段提供了理论依据和数据支持。
任帅[8]（2018）在《超顺磁性氧化铁双模态纳米探针在胰腺癌诊疗中的应用研究》文中进行了进一步梳理第一部分超顺磁性氧化铁双模态纳米探针的构建及性能检测目的合成磷脂聚乙二醇（DSPE-PEG-2000）修饰的磁性纳米颗粒,构建基于被动靶向原理的MRI及荧光双模态靶向分子探针Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO,对纳米颗粒及探针的性能进行表征。材料与方法1、Fe3O4纳米颗粒的合成:取20ml二辛醚、2mmol的乙酰丙酮铁以及体积比为3.4:0.6（总量为12mmol）的油酸及油胺置于50ml三颈瓶中,向体系内持续通氮气,加热至110℃后打开瓶塞并保持1h。继续升温至220℃,反应2h,此时溶液由棕红色转变为光亮的黑色。继续加热至290℃,并维持1h。移除热源,待体系降至室温后,将产物转移入烧杯并置于强磁场上,加入一定量无水乙醇后洗涤3-4次,以便去除残余的油酸及油胺。最后加入氯仿,制得Fe3O4-OA在室温保存。2、Fe3O4-PEG的合成:取Fe3O4-OA氯仿溶液,与DSPE-PEG-2000氯仿溶液混合均匀,然后加入5ml去离子水,置于70℃水浴锅内旋转蒸发15min,使样品分散于去离子水中。将分散液以3000rpm/min转速离心5min,后用去离子水洗涤三次。最后使用滤膜过滤Fe3O4-PEG水溶液,置于4℃条件下保存。3、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针的构建:将GFLG（Gly-Phe-Leu-Gly,甘氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-甘氨酸）与EDC/NHS混合,活化20分钟,加入大黄素（EMO）反应2h,得到GFLG-EMO。将GFLG-EMO与Cy7、Fe3O4-PEG活化液混合（EDC/NHS活化）震荡反应12h。得到的产物过柱纯化,即可得到探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO。4、Fe3O4-PEG-Cy7/Fe3O4-PEG-Cy7-EMO纳米探针的性能表征:采用透射电子显微镜（Transmission electron microscopy,TEM）观察磁性纳米颗粒的粒径及晶体结构;采用振动样品磁强计（Vibrating sample magnetometer,VSM）、磁共振成像仪（MRI）检测纳米探针的磁学性质;采用动态光散射（Dynamic light scattering,DLS）测量纳米探针自身及随pH值变化的水动力尺寸;观察纳米探针的胶体稳定性能并测其粒径的改变情况;采用荧光成像设备检验纳米探针的荧光成像。结果TEM结果显示Fe3O4的核心粒径大约9.1±1.7nm,有较好的分散性;VSM结果显示在外加磁场为0时,Fe3O4几乎没有剩磁,为一条闭合的磁滞回力曲线,证明Fe3O4为超顺磁性材料,其饱和的磁化强度为55.18emu/g,适合作为MR成像的T2对比剂;DLS测得Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO水动力尺寸分别为27.59±8.26nm、29.81±9.79nm、28.58±8.47nm,其水动力尺寸在在不同pH值溶液中变化不大,稳定性较好;Zeta电位仪测得Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO表面电荷分别为-40.2±6.83mV、-39.8±7.12mV、-38.7±6.32mV;体外弛豫曲线测得Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的r2值分别为95.0m/Ms、86.9m/Ms、103.5m/Ms,证明探针可进行MR T2成像;将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO静置于不同浓度的生理盐水或不同pH值缓冲盐溶液中,7天均未出现明显沉淀,证明Fe3O4-PEG-Cy7-EMO纳米探针具有良好的稳定性;MRI成像显示Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的T2WI成像信号随其浓度的增加而减弱;样品荧光实验结果证明探针具有较强荧光,在避光条件下可保存46个月。结论超顺磁性氧化铁双模态纳米探针Fe3O4-PEG-Cy7,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO具有粒径较小、磁学性能好,荧光特性佳及胶体稳定性良好的特点;体外MRI成像结果显示Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的T2WI成像信号随其浓度的增加而下降,证明其可用作MR T2WI成像。第二部分被动靶向胰腺癌细胞分子探针的体外实验目的将Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1、人胚肺细胞株MRC-5及人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE共孵育,从体外细胞水平验证探针的靶向性及探针对细胞的毒性作用。材料及方法（1）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,通过普鲁士蓝染色观察细胞对探针吞噬情况,并设人胚肺细胞株MRC-5及人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（2）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3共孵育,采用TEM观察探针在细胞内的分布,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（3）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3共孵育,用0.5ml 1%琼脂糖重悬细胞团,收集至1.5ml EP管中,置于1.5T磁共振下扫描,验证探针对胰腺癌细胞靶向性,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（4）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3共孵育,用0.5ml 1%琼脂糖重悬细胞团,收集至1.5ml EP管中,置于荧光成像设备下观察,验证验证探针对胰腺癌细胞靶向性,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（5）将Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,采用MTT法观察其对细胞的毒性作用;（6）将Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,采用流式细胞仪测定细胞的凋亡率,验证其对细胞的毒性作用,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（7）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、XPA-1共孵育,采用Hoechst染色通过对细胞形态的观察检测探针对细胞的毒性作用;（8）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,通过对细胞内ROS活性氧的观察探讨探针对细胞产生毒性作用的可能机制。结果（1）普鲁士蓝染色结果显示较正常细胞比,胰腺癌细胞内有更多蓝染颗粒,其代谢更为活跃,对探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的吞噬作用更强;（2）TEM显示Bx PC-3细胞株内有较明显Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针分布,而对照组细胞内未见明显探针分布;（3）细胞MRI成像说明胰腺癌细胞对探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的吞噬作用更强,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO可明显降低T2WI信号值,并与探针浓度呈正相关;（4）细胞荧光成像说明胰腺癌细胞对探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的吞噬作用更强,且荧光信号强度与探针浓度正相关;（5）细胞MTT实验说明较Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7比,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO对胰腺癌细胞增殖的抑制作用更明显,且与探针浓度正相关;（6）细胞流式凋亡结果显示较对照组细胞比,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO对胰腺癌细胞的抑制作用更明显,可显着抑制胰腺癌细胞的增殖,其抑制作用要高于Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7;（7）细胞Hoechst染色结果说明Fe3O4-PEG-Cy7-EMO可明显抑制胰腺癌细胞增殖,细胞形态发生变化,最终走向凋亡;（8）细胞ROS实验说明Fe3O4-PEG-Cy7-EMO促进胰腺癌细胞的凋亡可能与其在细胞内产生活性氧相关。结论本实验合成的分子探针Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO对胰腺癌细胞有较好的转染率,能够有效抑制胰腺癌细胞的增殖,而对正常细胞的抑制作用不明显;且探针具备MRI和荧光成像的双重效果,为潜在的MRI/荧光双模态靶向分子探针。第三部分被动靶向胰腺癌组织分子探针的体内实验目的检测探针的血液相容性;建立人胰腺癌裸鼠原位模型,通过荷瘤小鼠尾静脉注射探针,采用MRI/荧光双模态成像,并与病理组织普鲁士蓝染色对照来验证探针的MRI/荧光成像效果及小鼠体内的分布情况,寻找最佳成像时间点。材料及方法（1）培养转染绿色荧光蛋白的人胰腺癌细胞株Bx PC-3（Bx PC-3-GFP）,细胞生长状况良好时,胰酶消化细胞并离心,将细胞团混悬液注射于15只裸鼠腹部皮下。通过动物荧光成像系统实时观察皮下肿瘤的生长情况,待肿瘤长至8-10mm时,解剖皮下瘤,将小块癌组织缝合到裸鼠胰腺,荧光设备下动态监测胰腺肿瘤的生长情况,待肿瘤生长到1cm左右时进行MRI/荧光成像实验。（2）随机取12只原位移植瘤小鼠,分为三组,先行MR T2WI平扫,分别于注射探针前与注射后2h、4h、6h、24h、48h各时间点行增强扫描,观察肿瘤信号变化,并绘制信号-时间变化曲线。于6h、24h、48h时间点处死小鼠,解剖脏器,包埋,制作病理切片,行HE、普鲁士蓝染色。（3）取剩余3只原位移植瘤小鼠,分别于注射前与注射Fe3O4-PEG-Cy7-EMO后2h、4h、6h、24h、48h各时间点置于荧光设备下成像。于6h、24h、48h时间点各处死1只小鼠,取主要脏器及肿瘤组织在荧光设备下成像。结果MRI与荧光成像均可以显示肿瘤部位有较多探针的分布,且MRI结果进一步提示在6h时间点,肿瘤组织T2信号下降最为明显;而荧光成像提示在尾静脉注射2h后,肝脾内也有探针的累积,说明肝脾对探针也有吞噬作用。病理HE染色提示主要脏器细胞无明显异常,说明探针对各脏器无明显毒性作用;而普鲁士蓝染色结果显示与肝脾相比,肿瘤内有较明显的蓝染颗粒,证明探针可以通过肝脾的吞噬到达肿瘤内部。结论MRI与荧光实验显示肝脾、肿瘤组织内均有Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针分布,但在780nm激发光下肿瘤组织具有更强的荧光信号,说明Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针通过被动靶向也能有较好的MRI/荧光成像效果。普鲁士蓝染色进一步显示肿瘤组织内有明显的蓝染颗粒,说明探针可通过肝脾吞噬并到达肿瘤组织。
郭剑军[9]（2017）在《超顺磁性氧化铁纳米粒子的制备及其在大鼠脑部的扩散和分布研究》文中研究表明本文以乙酰丙酮铁（Fe（acac）3）为铁源,采用高温热分解法合成出不同有机物修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒子（SPIONs）。使用X射线衍射分析（XRD）和透射电子显微镜（TEM）分析样品的晶相和形貌,傅立叶红外光谱仪（FTIR）分析氧化铁表面的修饰情况,纳米粒度&zeta电位分析仪测量样品的水合动力学粒径以及电位值,超导量子干涉仪（SQUID）分析样品的磁性能。将样品注射进入SD大鼠脑内,24 h之后解剖取脑,利用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）和TEM观察氧化铁纳米粒子在脑内的存在和分布情况。主要研究结果如下:（1）采用高温热分解法制备出PEG-SPIONs。测试表征得知:合成的样品结晶度好,分散性良好,平均粒径为8.8 nm,PEG修饰在氧化铁纳米粒子表面,水和动力学粒径为20 nm,有良好的超顺磁性。将样品注入大鼠右脑室和黑质,通过ICP-OES和透射电镜观察氧化铁纳米粒子的扩散和分布情况。观察发现:右脑室注射的大鼠脑在小脑、下丘脑、海马区域有较多纳米粒子存在,其他区域的含量较少。黑质注射的大鼠脑在中脑、下丘脑区域有大量纳米粒子聚集,ICP-OES显示中脑区域铁含量极高。两种注射方式均在下丘脑均发现较多的纳米粒子。（2）制备出PEG/PEI-SPIONs并表征:样品结晶度好,分散性良好,平均粒径为10.3 nm,PEG和PEI均修饰在纳米氧化铁表面,水和动力学粒径为22 nm,有良好的超顺磁性。将样品注入大鼠右脑室,ICP-OES和透射电镜测试观察发现,纳米粒子分布主要集中在嗅球、丘脑、下丘脑区域,其他区域的较少。（3）制备出PEG/PVP-SPIONs并测试:合成氧化铁纳米粒子结晶度好,分散性良好,平均粒径为8.7 nm,且PEG和PVP均修饰在氧化铁纳米粒子表面,水和动力学粒径为20 nm,有超顺磁性。将其注入大鼠右脑室,ICP-OES和透射电镜观察发现,纳米粒子主要分布在海马区、丘脑、皮层区域,其他脑区较少。对比以上三种纳米粒子的分布情况可知:三种SPIONs在下丘脑和海马区域均有较多的分布。下丘脑和海马距离注射点比较近可能是原因之一。而PEG-SPIONs有大量粒子扩散到小脑区域,推测PEG-SPIONs容易穿过脑室到达小脑。PEG/PEI-SPIONs在嗅球较多聚集说明其从脑室向嗅球方向扩散的能力比较强。PEG-SPIONs黑质注射在中脑区域高度聚集,这说明纳米粒子由黑质向周边区域扩散比较困难。本实验为分析和研究了SPIONs在大鼠脑内扩散和分布情况,为将来SPIONs作为靶向药物载体治疗脑部疾病打一下一定的基础。
邵丹[10]（2015）在《多功能纳米粒子在肝癌诊治一体化中的应用研究》文中研究指明肝癌是严重危害我国人民健康的恶性肿瘤之一，尽管以手术切除为基础、并辅助化疗、热疗等综合治疗部分改善了肝癌的治疗效果，但是肝癌患者的长期存活率仍然较低。由于大多数原发性肝癌患者的病情隐匿、潜伏期长、肿瘤生长迅速导致早期诊断困难，而且治疗后的耐药、复发和转移成为了肝癌患者死亡的主要原因。因此，早期精确诊断、提高药物的靶向性、降低治疗的毒副作用成为目前肝癌诊治的挑战。近年来，纳米技术的兴起为攻克临床上肝癌诊治的难题带来了新的机遇，而作为纳米技术和生物医学的结晶，纳米医学已成为当前最具有转化潜力的交叉学科之一。纳米药物载体是为纳米医学领域研究的热点，其中无机纳米粒子作为纳米材料领域的后起之秀，以其独特的纳米结构和性能以及良好的稳定性、高产量、低成本等优势备受纳米医学工作者的关注。目前整合了诊断和治疗特点的多功能纳米平台引起了研究者们的广泛关注，此类多功能无机纳米材料须具备以下三个特点：（1）通过多种分子影像学手段实现对肿瘤的早期精确诊断。（2）联合多种治疗手段协同治疗肿瘤，在提高治疗效果的同时降低副作用。（3）对药物的肿瘤靶向运输、释放和治疗效果进行实时示踪，指导并调整给药剂量，实现肿瘤的个体化治疗。基于无机纳米材料的上述优点，本博士论文紧绕改善肝癌诊治效果这一中心目标，针对临床肝癌诊治中早期诊断难、传统化疗毒性大、效果差以及基因治疗靶向性差三大挑战，分别以量子点和磁性介孔二氧化硅两种无机纳米粒子为基础，发展智能分子设计、纳米特性控制、靶向分子修饰等纳米药物技术，构筑高效、安全的多功能纳米平台，开发具有靶向肝癌的基因治疗和降低肝癌化疗毒副作用的新型纳米药物，揭示其选择性杀伤肝癌细胞的分子机制；利用分子影像学技术对药物在体内的运输和释放过程进行实时示踪，并对肝癌治疗效果与生物安全性进行系统性评价；终而实现肝癌的诊治一体化。本论文主要创新性研究成果概括如下：（1）为了实时示踪HSV-TK/GCV自杀基因系统，我们成功的将量子点偶联TK基因，证实生物偶联既不影响量子点的发光特性，也不影响TK基因的生物学活性，实时示踪发现TK基因于转染24h进入胞核并表达TK蛋白，确定24h为GCV的最佳给予时间，并在体内外成功对HSV-TK/GCV自杀基因系统的抗肝癌效果进行监测，提示量子点可以作为示踪HSV-TK/GCV自杀基因系统的理想载体。（2）为了实现自杀基因的靶向肝癌治疗，我们成功构筑叶酸脂质体担载量子点自杀基因复合体（FL/QD-TK），证实其可在体外靶向和选择性杀伤叶酸受体高表达肝癌细胞，并可在体内外可视化示踪TK基因运输和治疗效果，同时具备了较好的生物安全性，提示FL/QD-TK作为一种潜在的高效低毒的纳米基因药物有望应用于肝癌的诊治一体化。（3）为了驾驭镉系量子点的生物毒性用于肝癌治疗，我们成功的制备出量子点脂质复合体（QD-LC），证实其可通过巨胞饮途径大量内吞进入肝癌细胞产生大量的ROS，通过线粒体依赖的Caspase凋亡途径选择性杀伤肝癌细胞。QD-LC还可抑制肝癌微小瘤灶的形成，并在实现肝癌荷瘤有效治疗的同时具备了较好的生物安全性，提示可利用镉系量子点内源性毒性实现肝癌的选择性治疗。（4）为了提高化疗药物治疗肝癌的有效性并降低毒副作用，我们通过优化反应条件制备出粒径合适、形貌均一的Janus型磁性介孔二氧化硅纳米粒子（M-MSNs），担载化疗药物DOX得到的Janus型M-MSNs-DOX具备了外加磁场介导的作用，证实Janus型M-MSNs-DOX可在体内外实现选择性肝癌治疗的效果，并具备了较好生物安全性。我们还证实外加磁场可增强Janus型M-MSNs-DOX的肝癌细胞内吞作用和在肿瘤部位的富集，且不影响其生物安全性。最后我们在体内外成功实现了肝癌诊治一体化的目标，提示Janus型M-MSNs有望解决肝癌化疗靶向性差、毒副作用大的弊端，实现肝癌的诊治一体化。综上所述，本论文通过构筑多功能纳米诊治平台，对肝癌靶向自杀基因治疗的监测、利用纳米毒性选择性治疗肝癌以及实现高效低毒的肝癌化疗策略进行了系统而又深入的研究，不仅成功实现了肝癌的诊治一体化，也为早日实现肝癌的早期诊断和个体化治疗提供新方法和新思路。
二、靶向治疗用Fe_3O_4 及其白蛋白包被磁性纳米粒子的制备(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、靶向治疗用Fe_3O_4 及其白蛋白包被磁性纳米粒子的制备(英文)（论文提纲范文）
（1）生物膜包被的铁纳米粒子通过免疫激活和铁死亡协同抗肿瘤（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 先天免疫与肿瘤 |
| 1.1.1 肿瘤发生与免疫系统的关系 |
| 1.1.2 以先天免疫为基础的抗肿瘤应用 |
| 1.2 铁代谢与肿瘤 |
| 1.2.1 肿瘤发生与铁代谢的关系 |
| 1.2.2 以铁代谢为基础的抗肿瘤应用 |
| 1.3 纳米技术抗肿瘤策略 |
| 1.3.1 纳米技术针对免疫反应的肿瘤治疗策略 |
| 1.3.1.1 核壳纳米医学 |
| 1.3.1.2 仿生纳米医学 |
| 1.3.2 纳米技术针对铁代谢的肿瘤治疗策略 |
| 1.3.2.1 纳米技术触发芬顿反应 |
| 1.3.2.2 纳米技术联合铁死亡疗法 |
| 1.4 Fe_3O_4纳米材料 |
| 1.4.1 Fe_3O_4纳米材料的合成方式 |
| 1.4.2 Fe_3O_4纳米材料的生物学应用 |
| 1.5 立项依据 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 2.1 序言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 细菌,细胞与动物 |
| 2.2.4 主要试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 生物膜包被的铁纳米颗粒的制备及表征 |
| 2.3.1.1 铁矿化细菌的表征 |
| 2.3.1.2 铁矿化大肠杆菌的能谱点分析 |
| 2.3.1.3 铁矿化大肠杆菌灭活菌体的制备 |
| 2.3.1.4 铁矿化大肠杆菌菌影的制备 |
| 2.3.1.5 铁矿化金葡菌膜囊泡的提取 |
| 2.3.1.6 铁矿化大肠杆菌内膜的提取 |
| 2.3.1.7 铁矿化大肠杆菌内膜包被PLGA的制备 |
| 2.3.1.8 PEF对照组FN,PLF的合成及表征 |
| 2.3.2 CCK-8 细胞毒实验 |
| 2.3.3 PEF的细胞摄取及体外免疫刺激研究 |
| 2.3.3.1 小鼠骨髓来源树突状细胞的提取 |
| 2.3.3.2 PEF的细胞摄取 |
| 2.3.3.3 PEF刺激BMDCs成熟 |
| 2.3.3.4 PEF刺激BMDCs产生免疫因子 |
| 2.3.4 不同剂量PEF的肿瘤治疗效果 |
| 2.3.5 PEF促进肿瘤细胞铁死亡的研究 |
| 2.3.5.1 CCK-8 细胞毒实验 |
| 2.3.5.2 Western Blot验证肿瘤细胞铁死亡 |
| 2.3.5.3 qPCR验证肿瘤细胞铁死亡 |
| 2.3.6 PEF的体内安全性评价 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 生物膜包被的铁纳米颗粒的制备及表征 |
| 3.2 CCK-8 细胞毒实验 |
| 3.3 PEF体外免疫反应的验证 |
| 3.4 PEF体内应用剂量的研究 |
| 3.5 PEF诱导的肿瘤细胞铁死亡 |
| 3.5.1 体外验证PEF诱导的铁死亡 |
| 3.5.2 体内验证PEF诱导的铁死亡 |
| 3.6 PEF在铁死亡和免疫反应协同作用下的抗肿瘤效果 |
| 3.7 PEF的体内安全性评价 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）Fe3O4@PDA磁靶向间充质干细胞治疗类风湿性关节炎的机制及其毒理学评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 前言 |
| 1.1 类风湿关节炎 |
| 1.1.1 概述 |
| 1.1.2 治疗方法 |
| 1.2 干细胞治疗 |
| 1.2.1 概述 |
| 1.2.2 干细胞在类风湿关节炎等疾病中的应用 |
| 1.3 磁靶向间充质干细胞治疗类风湿关节炎 |
| 1.3.1 概述 |
| 1.3.2 Fe_3O_4@PDA纳米粒子磁靶向间充质干细胞 |
| 1.4 Fe_3O_4@PDA纳米粒子毒理学应用限制 |
| 1.5 细胞膜伪装纳米粒子的研究现状 |
| 1.6 研究思路及研究内容 |
| 第2章 Fe_3O_4@PDA磁靶向人脐带间充质干细胞对家兔类风湿性关节炎骨软骨缺损模型治疗的机制研究 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 主要试剂和仪器 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 Fe_3O_4及Fe_3O_4@PDA的化学合成 |
| 2.3.2 Fe_3O_4、Fe_3O_4@PDA的化学表征 |
| 2.3.3 溶血实验 |
| 2.3.4 家兔类风湿关节炎骨软骨缺损模型的建立 |
| 2.3.5 家兔的治疗分组及剂量 |
| 2.3.6 家兔的一般指标检测 |
| 2.3.7 HUMSCs向缺损部位局部富集的检测 |
| 2.3.8 大体外相观察与评分 |
| 2.3.9 组织学评价 |
| 2.3.10 家兔股骨髁标本Micro CT的检测 |
| 2.3.11 特殊染色 |
| 2.3.12 生化ELISA检测 |
| 2.3.13 相关基因m RNA表达水平的实时定量RT-PCR检测 |
| 2.4 统计学分析 |
| 2.5 实验结果与讨论 |
| 2.5.1 Fe_3O_4、Fe_3O_4@PDA的合成与化学表征 |
| 2.5.2 Fe_3O_4@PDA的溶血实验 |
| 2.5.3 家兔的一般指标结果 |
| 2.5.4 HUMSCs靶向缺损部位结果 |
| 2.5.5 家兔膝关节大体外相观察与评分 |
| 2.5.6 家兔膝关节软骨修复的组织学评价 |
| 2.5.7 家兔膝关节特殊染色 |
| 2.5.8 家兔股骨髁标本MicroCT的检测结果 |
| 2.5.9 软骨修复特异性标志物的生化分析 |
| 2.5.10 血液中炎性因子的生化分析 |
| 2.5.11 家兔膝关节缺损相关基因m RNA表达水平 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 基于PI3K/AKT/mTOR信号通路的三种磁性纳米颗粒对于小鼠肾脏组织的凋亡和自噬的毒性影响 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 主要试剂与仪器 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 Fe_3O_4及Fe_3O_4@PDA的化学合成 |
| 3.3.2 HUMSCs膜囊泡的制备 |
| 3.3.3 MSC(Fe_3O_4@PDA)的制备 |
| 3.3.4 Fe_3O_4、Fe_3O_4@PDA及MSC(Fe_3O_4@PDA)的化学表征 |
| 3.3.5 MSC(Fe_3O_4@PDA)纳米粒子膜蛋白的表征 |
| 3.3.6 动物实验分组及染毒 |
| 3.3.7 Tunel染色法 |
| 3.3.8 透射电子显微镜分析 |
| 3.3.9 相关基因m RNA表达水平的检测 |
| 3.3.10 相关蛋白表达水平的检测 |
| 3.4 统计学分析 |
| 3.5 实验结果与讨论 |
| 3.5.1 Fe_3O_4、Fe_3O_4@PDA及MSC(Fe_3O_4@PDA)的合成及表征 |
| 3.5.2 MSC(Fe_3O_4@PDA)纳米颗粒膜蛋白的表征 |
| 3.5.3 Fe_3O_4、Fe_3O_4@PDA及MSC(Fe_3O_4@PDA)对肾脏凋亡的影响 |
| 3.5.4 Fe_3O_4、Fe_3O_4@PDA及MSC(Fe_3O_4@PDA)对肾脏自噬的影响 |
| 3.5.5 Fe_3O_4、Fe_3O_4@PDA及MSC(Fe_3O_4@PDA)对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 全文结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）pH响应性聚电解质包覆载药三氧化二钆@介孔二氧化硅纳米粒子在MRI示踪药物靶向治疗肝癌中的应用（论文提纲范文）
| 中英文缩写对照 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 pH响应性聚电解质包覆载药三氧化二钆@介孔二氧化硅纳米粒子的制备和性能研究 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.2.1 试剂和材料 |
| 1.2.2 仪器和设备 |
| 1.2.3 实验方法 |
| 1.2.3.1 合成Gd_2O_3纳米粒子 |
| 1.2.3.2 合成MSN |
| 1.2.3.3 合成Gd_2O_3@MSN |
| 1.2.3.4 合成P(DMA-CO-TPAMA)及FA-P(DMA-co-APMA) |
| 1.2.3.5 Gd_2O_3@MSNPs氨基化 |
| 1.2.3.6 pH响应多层聚电解质包覆Gd_2O_3@MSN-DOX的制备 |
| 1.2.3.7 MRI扫描表征Gd_2O_3@MSN作为MRI对比剂的性能 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 Gd_2O_3纳米粒子、MSN及裸Gd_2O_3@MSN的合成与表征 |
| 1.3.2 P(DMA-co-TPAMA)的合成及Gd_2O_3@MSN多层膜包覆与表征 |
| 1.3.3 pH引发的药物释放特性 |
| 1.3.4 MRI弛豫性能测试 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 pH响应性聚电解质包覆载药三氧化二钆@介孔二氧化硅纳米粒子对肝癌细胞的杀伤作用和机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试剂和材料 |
| 2.2.2 仪器和设备 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.3.1 细胞毒性实验 |
| 2.2.3.2 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX在细胞内的代谢分布 |
| 2.2.3.3 细胞凋亡率检测 |
| 2.2.3.4 细胞荧光寿命检测 |
| 2.2.3.5 Western Blot检测 |
| 2.2.3.6 细胞电镜检测 |
| 2.2.3.7 细胞核磁共振成像扫描 |
| 2.2.4 统计处理 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 细胞毒性实验 |
| 2.3.2 共聚焦激光扫描显微镜检测Gd_2O_3@MSN-DOX及FA-Gd_2O_3@MSN-DOX在细胞内的代谢分布 |
| 2.3.3 细胞凋亡率检测 |
| 2.3.4 细胞荧光寿命检测 |
| 2.3.5 Western Blot检测结果 |
| 2.3.6 细胞透射电镜检测结果 |
| 2.3.7 细胞核磁共振成像扫描 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 pH响应性聚电解质包覆载药三氧化二钆@介孔二氧化硅纳米粒子体内代谢与生物安全性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试剂和材料 |
| 3.2.2 仪器和设备 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.2.3.1 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX在体内代谢实验 |
| 3.2.3.2 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX在瘤体内代谢实验 |
| 3.2.3.3 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX静脉注射对血常规和肝肾功能影响 |
| 3.2.3.4 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX对肝癌皮下移植肿瘤治疗效果观察 |
| 3.2.3.5 FA-Gd_2O_3@MSN对兔VX2肝癌模型MRI增强效果观察 |
| 3.2.4 统计处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX在体内代谢实验 |
| 3.3.2 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX在瘤体内代谢实验 |
| 3.3.3 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX静脉注射对血常规和肝肾功能影响 |
| 3.3.4 FA-Gd_2O_3@MSN-DOX对肝癌皮下移植肿瘤治疗效果观察 |
| 3.3.5 FA-Gd_2O_3@MSN对兔VX2肝癌模型MRI增强效果观察 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 诊疗一体化MRI靶向对比剂的研究进展 |
| 参考文献 |
（4）蛋白质仿生纳米药物用于原位骨肿瘤及淋巴结转移的诊疗研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 蛋白质仿生纳米药物构建策略 |
| 1.2.1 .化学共轭 |
| 1.2.2 .脱溶化学试剂偶联 |
| 1.2.3 .原位脱模 |
| 1.2.4 .喷雾脱水 |
| 1.2.5 .蛋白质模板导向的仿生合成 |
| 1.2.6 .混和 |
| 1.3 载药机制 |
| 1.3.1 共价键 |
| 1.3.2 物理性包覆 |
| 1.4 蛋白质功能化的影响 |
| 1.4.1 改善生物相容性和降低毒性 |
| 1.4.2 长循环特征 |
| 1.4.3 改进了胶体稳定性 |
| 1.5 提高靶向效率 |
| 1.5.1 小分子 |
| 1.5.2 抗体 |
| 1.5.3 肽 |
| 1.6 蛋白质-无机纳米粒子的药物应用 |
| 1.6.1 MRI增强成像 |
| 1.6.2 荧光成像 |
| 1.6.3 双模态成像 |
| 1.6.4 多模态成像 |
| 1.6.5 蛋白质仿生纳米药物的癌症治疗 |
| 1.7 课题设计与研究内容 |
| 1.8 参考文献 |
| 第二章 基于~(99m)Tc 与近红外染料标记的血清蛋白仿生氧化钆纳米药物用于原位骨肿瘤及其淋巴转移的多模态成像 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 ~(99m)Tc-Gd@OVA-Cy纳米药物的合成 |
| 2.2.5 原位骨肉瘤模型的构建以及多模态成像 |
| 2.2.6 健康小鼠和原位骨肉瘤模型的淋巴引流成像 |
| 2.2.7 体内生物相容性和生物分布 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 2.5 参考文献 |
| 第三章 活体光声/单光子发射计算机断层成像动态监控聚集增强的蛋白质仿生光热纳米药物 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 Cy@Silk 纳米试剂的合成 |
| 3.2.5 Cy@Silk 纳米试剂的放射性核素~(99m)Tc 标记 |
| 3.2.6 体外光热和光声效应 |
| 3.2.7 体内多模态成像 |
| 3.2.8 体内红外热成像 |
| 3.2.9 体内抗癌效果及病理分析 |
| 3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 Cy@Silk纳米试剂的合成与表征 |
| 3.3.2 体外细胞毒性和PTT效应 |
| 3.3.3 光声/SPECT成像在体动态分布跟踪 |
| 3.3.4 肿瘤的活体光声/SPECT成像 |
| 3.3.5 骨肉瘤的体内光热治疗 |
| 3.4 参考文献 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 研究总结 |
| 4.2 研究展望 |
| 个人简历及攻读博士学位期间的成果 |
| 致谢 |
（5）刺激响应型仿生纳米药物载体设计及其肿瘤联合治疗的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 内源性刺激响应型纳米药物递送系统 |
| 1.1.1 pH响应的药物递送 |
| 1.1.2 氧化还原响应的药物递送 |
| 1.1.3 酶响应的药物递送 |
| 1.1.4 葡萄糖响应的药物递送 |
| 1.1.5 ATP响应的药物递送 |
| 1.2 外源性刺激响应型纳米药物递送系统 |
| 1.2.1 热敏感的药物递送 |
| 1.2.2 磁响应的药物递送 |
| 1.2.3 超声响应的药物递送 |
| 1.3 选题意义和设计思路 |
| 1.4 论文创新点 |
| 第二章 具有pH/GSH双重响应的白蛋白智能纳米系统的设计及其在肿瘤治疗中的应用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验仪器及试剂 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 D/R@BSA-R的合成 |
| 2.3.2 D/R@BSA-R的形貌与表征 |
| 2.3.3 体外DOX释放实验 |
| 2.3.4 细胞培养 |
| 2.3.5 体外细胞毒性测试 |
| 2.3.6 体外细胞摄取实验 |
| 2.3.7 过量RGD竞争实验 |
| 2.3.8 D/R@BSA-R在细胞内定位 |
| 2.3.9 D/R@BSA-R的吸收通路 |
| 2.3.10 细胞凋亡检测 |
| 2.3.11 体外siRNA转染效率 |
| 2.3.12 细胞迁移实验 |
| 2.3.13 细胞侵袭实验 |
| 2.3.14 荷瘤裸鼠模型的建立及活体成像实验 |
| 2.3.15 体内抗肿瘤评价 |
| 2.3.16 H&E染色 |
| 2.3.17 免疫组化分析 |
| 2.3.18 血液生化指标分析 |
| 2.3.19 核磁共振成像分析 |
| 2.3.20 统计学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 D/R@BSA-R的制备与表征 |
| 2.4.2 D/R@BSA-R的刺激响应性 |
| 2.4.3 细胞摄取和体外控制释放。 |
| 2.4.4 基因沉默和癌细胞迁移和侵袭的抑制。 |
| 2.4.5 D/R@BSA-R体内肿瘤靶向能力评估 |
| 2.4.6 D/R@BSA-R体内抗肿瘤实验 |
| 2.4.7 D/R@BSA-R体内毒性评价 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 光触发仿生红细胞膜纳米系统的制备及其联合抗肿瘤研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验仪器 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 羧基修饰的白蛋白(aBSA) |
| 3.3.2 载药蛋白纳米粒子的制备 |
| 3.3.3 靶向配体的制备(c RGD-PEG-DSPE) |
| 3.3.4 RBC的制备 |
| 3.3.5 R-RBC@BPt I的制备 |
| 3.3.6 D/R@BSA-R的形貌与表征 |
| 3.3.7 体外Pt释放实验 |
| 3.3.8 单线态氧的检测 |
| 3.3.9 细胞培养 |
| 3.3.10 体外细胞毒性测试 |
| 3.3.11 细胞凋亡检测 |
| 3.3.12 活死细胞染色实验 |
| 3.3.13 体外细胞摄取 |
| 3.3.14 R-RBC@BPt I在细胞内定位 |
| 3.3.15 免疫逃逸实验 |
| 3.3.16 过量RGD竞争实验 |
| 3.3.17 细胞内活性氧检测 |
| 3.3.18 肿瘤球模型的建立 |
| 3.3.19 B16F10荷瘤小鼠模型的建立及体内药代动力学和分布 |
| 3.3.20 R-RBC@BPt I体内抗肿瘤评价 |
| 3.3.21 H&E染色和免疫组化分析 |
| 3.3.22 血液生化指标分析 |
| 3.3.23 MRI分析 |
| 3.3.24 肺转移模型的建立和肺转移抑制 |
| 3.3.25 统计学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 R-RBC@BPt I的制备与表征 |
| 3.4.2 R-RBC@BPt I的免疫逃逸评价 |
| 3.4.3 R-RBC@BPt I的体外毒性评价 |
| 3.4.4 R-RBC@BPt I的细胞摄取 |
| 3.4.5 R-RBC@BPt I对 B16F10 细胞的抗凋亡机制 |
| 3.4.6 R-RBC@BPt I在 B16F10 肿瘤球体中的渗透 |
| 3.4.7 R-RBC@BPt I在荷瘤小鼠中的体内分布 |
| 3.4.8 R-RBC@BPt I体内抗肿瘤及肺转移抑制实验 |
| 3.4.9 R-RBC@BPt I体内毒性评价 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 二酶合一的仿生级联递送系统用于肿瘤深度渗透和特异性治疗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验仪器 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 GOx-Fe的制备 |
| 4.3.2 Angiopep-2-PEG-DSPE的制备 |
| 4.3.3 RBC的提取 |
| 4.3.4 GOx-Fe@RI的制备 |
| 4.3.5 GOx-Fe@RI-A的制备 |
| 4.3.6 体外Fe2+的释放 |
| 4.3.7 酶动力学反应 |
| 4.3.8 GOx-Fe@RI-A中·OH的产生 |
| 4.3.9 细胞培养 |
| 4.3.10 体外细胞毒性测试 |
| 4.3.11 活死细胞染色实验 |
| 4.3.12 细胞内活性氧检测 |
| 4.3.13 肿瘤球模型的建立 |
| 4.3.14 C6荷瘤小鼠模型的建立及体内药代动力学 |
| 4.3.15 GOx-Fe@RI-A体内抗肿瘤评价 |
| 4.3.16 H&E染色和免疫组化分析 |
| 4.3.17 血液生化指标分析 |
| 4.3.18 统计学分析 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 GOx-Fe@RI-A的制备与表征 |
| 4.4.2 GOx-Fe@RI-A的级联催化性能 |
| 4.4.3 GOx-Fe@RI-A的体外细胞毒性 |
| 4.4.4 GOx-Fe@RI-A在肿瘤球中的渗透 |
| 4.4.5 GOx-Fe@RI-A的药代动力学研究 |
| 4.4.6 GOx-Fe@RI-A的体内荧光成像 |
| 4.4.7 GOx-Fe@RI-A的体内抗肿瘤实验 |
| 4.4.8 GOx-Fe@RI-A的体内毒性评价 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间主要科研成果 |
| 致谢 |
（6）多功能磁性纳米粒子的制备及其在动脉粥样硬化诊疗中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 动脉粥样硬化的发病机制及治疗现状 |
| 1.3 分子影像技术在动脉粥样硬化诊断中的应用价值 |
| 1.4 磁性纳米粒子在 As 中的应用 |
| 1.5 靶向纳米技术在 As 干预中的应用 |
| 1.6 选题意义和设计思路 |
| 参考文献 |
| 第一章:RAP@PFN1-CD-MNPs纳米载药体系的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试剂与仪器 |
| 2.3 实验方法和步骤 |
| 2.3.1 超小超顺磁四氧化三铁(USPIO)的制备及表征 |
| 2.3.2 PFN1-CD-MNPs靶向载体的制备 |
| 2.3.3 CD-MNPs-Cy5.5和PFN1-CD-MNPs-Cy5.5 的制备 |
| 2.3.4 RAP@PFN1-CD-MNPs靶向载药系统的制备 |
| 2.3.5 RAP@PFN1-CD-MNPs-Cy5.5 的制备 |
| 2.3.6 表征纳米粒子 |
| 2.3.7 纳米载体的稳定性评估 |
| 2.3.8 纳米载体的细胞毒性评估 |
| 2.3.9 PFN1-CD-MNPs的溶血测定 |
| 2.3.10 细胞对PFN1-CD-MNPs载体的摄取 |
| 2.3.11 RAP@PFN1-CD-MNPs靶向载药系统的载药量和包封率的测定 |
| 2.3.12 药物体外释放测试 |
| 2.3.13 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 超小超顺磁四氧化三铁(USPIO)的物化性能分析 |
| 2.4.2 PFN1-CD-MNPs载体的物化性能分析 |
| 2.4.3 PFN1-CD-MNPs靶向载体的稳定性 |
| 2.4.4 PFN1-CD-MNPs的细胞毒性及血液相容性 |
| 2.4.5 纳米体系体外对细胞的靶向性分析 |
| 2.4.6 细胞膜表面受体的表达 |
| 2.4.7 RAP@PFN1-CD-MNPs靶向载药系统的载药量和包封率 |
| 2.4.8 纳米药物体外缓释 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章:PFN1-CD-MNPs纳米体系体内外双模态成像研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验仪器与试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 PFN1-CD-MNPs体外T2弛豫性能扫描 |
| 3.3.2 动脉粥样硬化模型的建立及实验动物分组 |
| 3.3.3 PFN1-CD-MNPs在正常组织器官中的分布 |
| 3.3.4 WB检测动脉斑块区profilin-1蛋白的表达 |
| 3.3.5 体内颈动脉MRI成像 |
| 3.3.6 离体主动脉近红外荧光成像 |
| 3.3.7 病理学检查 |
| 3.3.8 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 PFN1-CD-MNPs纳米体系的T_2弛豫性能 |
| 3.4.2 动脉粥样硬化模型的成功建立及血脂谱改变 |
| 3.4.3 PFN1-CD-MNPs在正常非靶器官内的分布 |
| 3.4.4 斑块区profilin-1 蛋白的表达分析 |
| 3.4.5 纳米体系在体内颈动脉斑块区的MRI成像 |
| 3.4.6 主动脉离体近红外荧光成像 |
| 3.4.7 病理普鲁士蓝染色检测纳米载体在斑块区的聚集 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 :RAP@PFN1-CD-MNPs纳米体系体内抗动脉粥样硬化疗效研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验仪器与试剂 |
| 4.2.2 Apo E-/-鼠As模型动物分组及给药方法 |
| 4.2.3 主动脉离体近红外荧光成像及大体油红染色 |
| 4.2.4 病理学及免疫组织化学检查 |
| 4.2.5 纳米药物体内安全性评价 |
| 4.2.6 统计学方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 离体主动脉近红外荧光成像结果 |
| 4.3.2 主动脉油红染色结果分析 |
| 4.3.3 斑块Masson三色染色及免疫组织化学检测结果 |
| 4.3.4 主要组织器官H&E及血液生化水平检测结果 |
| 4.4 .讨论 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 附录 |
| 缩略词表 |
| 在读期间发表论文 |
| 在读期间主要参与的科研项目 |
| 致谢 |
（7）纳米红细胞治疗体系联合光热/光动力与化疗对乳腺癌的协同作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、纳米红细胞治疗体系的制备及表征 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 主要仪器设备 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.1.4 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 吲哚菁绿/阿霉素纳米复合物的结构表征 |
| 1.2.2 纳米红细胞治疗体系的结构表征与分析 |
| 1.2.3 纳米红细胞治疗体系体外光热性能考察 |
| 1.2.4 纳米红细胞治疗体系体外热致产气性能考察 |
| 1.2.5 纳米红细胞治疗体系体外爆破性释药特性考察 |
| 1.2.6 纳米红细胞治疗体系体外光动力效应考察 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 纳米红细胞治疗体系的制备及表征 |
| 1.3.2 纳米红细胞治疗体系热致爆破性释药行为评价 |
| 1.3.3 纳米红细胞治疗体系体外增强的光动力性能检测 |
| 1.4 小结 |
| 二、纳米红细胞治疗体系体外协同抗肿瘤作用的考察 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 纳米红细胞治疗体系结合激光照射促进DOX被4T1细胞摄取 |
| 2.2.2 纳米红细胞治疗体系结合激光照射对4T1 细胞的毒性作用 |
| 2.2.3 纳米红细胞治疗体系结合激光照射对4T1 细胞凋亡的影响 |
| 2.2.4 纳米红细胞治疗体系结合激光照射对4T1 细胞与HUVEC细胞的作用比较 |
| 2.2.5 纳米红细胞治疗体系结合激光照射触发4T1 细胞中ROS产生的作用考察 |
| 2.2.6 纳米红细胞治疗体系结合激光照射对4T1 细胞线粒体凋亡通路的激活效应 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 纳米红细胞治疗体系在细胞中的摄取和分布 |
| 2.3.2 纳米红细胞治疗体系体外协同抗乳腺癌作用考察 |
| 2.3.3 纳米红细胞治疗体系结合激光照射对线粒体凋亡通路的激活作用 |
| 2.4 小结 |
| 三、纳米红细胞治疗体系体内抗肿瘤作用评价 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 常用试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.1.5 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 纳米红细胞治疗体系在小鼠肿瘤中的滞留效应考察 |
| 3.2.2 纳米红细胞治疗体系体内光热效应和光动力效应评价 |
| 3.2.3 纳米红细胞治疗体系体内抗肿瘤效应评价 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 纳米红细胞治疗体系体内滞留效应考察 |
| 3.3.2 纳米红细胞治疗体系携氧增强PDT作用评价 |
| 3.3.3 纳米红细胞治疗体系体内抗肿瘤效应评价 |
| 3.4 小结 |
| 四、纳米红细胞治疗体系体内生物相容性评价 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 常用试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.1.4 实验方法 |
| 4.1.5 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 纳米红细胞治疗体系的生物相容性评价 |
| 4.2.2 纳米红细胞治疗体系对机体的生物安全性评价 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 纳米红细胞治疗体系的体内生物相容性 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 红细胞在药物传递系统中的应用研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）超顺磁性氧化铁双模态纳米探针在胰腺癌诊疗中的应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 超顺磁性氧化铁双模态纳米探针的构建及性能检测 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第二部分 被动靶向胰腺癌细胞分子探针的体外实验 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第三部分 被动靶向胰腺癌组织分子探针的体内实验 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 获奖情况 |
| 致谢 |
（9）超顺磁性氧化铁纳米粒子的制备及其在大鼠脑部的扩散和分布研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 超顺磁性纳米氧化铁概述 |
| 1.1.0 超顺磁性氧化铁纳米粒子的制备 |
| 1.1.1 超顺磁性氧化铁纳米粒子的表征 |
| 1.1.2 超顺磁性氧化铁纳米粒子的性质 |
| 1.2 超顺磁性氧化铁纳米粒子在药物递送的应用 |
| 1.2.1 SPIONs药物递送应用中重要注意事项 |
| 1.2.2 SPIONs药物释放特性 |
| 1.2.3 SPIONs脑部药物递送 |
| 1.2.4 SPIONs的化疗案例 |
| 1.2.5 放射标记的磁药递送系统 |
| 1.3 脑立体定位注射及大鼠脑结构的研究 |
| 1.3.1 脑立体定位技术概述 |
| 1.3.2 大鼠脑部结构和功能分析 |
| 1.4 SPIONs在脑部病理性疾病治疗方面的应用 |
| 1.4.1 帕金森氏症(Parkinson’s disease,PD) |
| 1.4.2 阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD) |
| 1.4.3 抑郁症 |
| 1.5 本文选题目的和意义以及研究内容 |
| 1.5.1 选题目的和意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第二章 PEG-SPIONs的制备及其脑部注射到大鼠脑部1d后扩散分布分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验原料与设备 |
| 2.2.1 实验原料 |
| 2.2.2 实验仪器与设备 |
| 2.3 合成实验设计与样品制备 |
| 2.3.1 实验设计 |
| 2.3.2 样品制备 |
| 2.4 PEG修饰的氧化铁纳米粒子的表征 |
| 2.4.1 样品的XRD表征 |
| 2.4.2 样品的TEM表征 |
| 2.4.3 样品的水合动力学粒径和Zeta电位 |
| 2.4.4 样品的红外分析 |
| 2.4.5 样品的磁性能分析 |
| 2.5 动物实验 |
| 2.5.1 确定样品的氧化铁浓度及注射量 |
| 2.5.2 脑立体定位注射 |
| 2.5.3 解剖和取脑 |
| 2.5.4 ICP-OES测试分析 |
| 2.5.5 超薄切片制作 |
| 2.5.6 TEM观察结果分析 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 PEG/PEI-SPIONs的制备及其脑部注射到大鼠脑部1d后扩散分布分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验原料与设备 |
| 3.2.1 实验原料 |
| 3.2.2 实验仪器与设备 |
| 3.3 合成实验设计与样品制备 |
| 3.3.1 实验设计 |
| 3.3.2 样品制备 |
| 3.4 PEG/PEI-SPIONs的表征 |
| 3.4.1 样品的XRD表征 |
| 3.4.2 样品的TEM表征 |
| 3.4.3 样品的水合动力学粒径和Zeta电位 |
| 3.4.4 样品的红外分析 |
| 3.4.5 样品的磁性能分析 |
| 3.5 动物实验 |
| 3.5.1 确定样品的氧化铁浓度及注射量 |
| 3.5.2 脑立体定位注射 |
| 3.5.3 解剖和取脑 |
| 3.5.4 ICP-OES测试分析 |
| 3.5.5 超薄切片制作 |
| 3.5.6 TEM观察结果分析 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 PEG/PVP-SPIONs的制备及其脑部注射到大鼠脑部1d后扩散分布分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验原料与设备 |
| 4.2.1 实验原料 |
| 4.2.2 实验仪器与设备 |
| 4.3 合成实验设计与样品制备 |
| 4.3.1 实验设计 |
| 4.3.2 样品制备 |
| 4.4 PEG/PVP-SPIONs的表征 |
| 4.4.1 样品的XRD表征 |
| 4.4.2 样品的TEM表征 |
| 4.4.3 样品的水合动力学粒径和Zeta电位 |
| 4.4.4 样品的红外分析 |
| 4.4.5 样品的磁性能分析 |
| 4.5动物实验 |
| 4.5.1 确定样品的氧化铁浓度及注射量 |
| 4.5.2 脑立体定位注射 |
| 4.5.3 解剖和取脑 |
| 4.5.4 ICP-OES测试分析 |
| 4.5.5 超薄切片制作 |
| 4.5.6 TEM观察结果分析 |
| 4.6 本章小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介、申请学位期间的研究成果及发表的学术论文 |
（10）多功能纳米粒子在肝癌诊治一体化中的应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 肝癌的诊治现状 |
| 1.3 基于纳米平台的肿瘤诊治一体化 |
| 1.4 选题依据和研究思路 |
| 1.5 参考文献 |
| 第2章 量子点标记自杀基因靶向治疗肝癌的体内外研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.1.1 肝癌的自杀基因治疗 |
| 2.1.1.1 自杀基因治疗的分类及原理 |
| 2.1.1.2 HSV-TK 自杀基因治疗的应用 |
| 2.1.1.3 自杀基因治疗肝癌的挑战 |
| 2.1.2 量子点的在基因治疗中的应用 |
| 2.1.2.1 量子点的性质、修饰和标记 |
| 2.1.2.2 量子点示踪基因的运输和表达 |
| 2.1.2.3 量子点在诊治一体化的肿瘤基因治疗中的应用 |
| 2.1.3 叶酸脂质体在肿瘤基因治疗中的应用 |
| 2.1.3.1 叶酸受体的分布和性质 |
| 2.1.3.2 叶酸脂质体的特性和靶向策略 |
| 2.1.3.3 叶酸脂质体在基因治疗中的应用 |
| 2.1.4 肝癌自杀基因治疗中当前尚未解决的问题与面临的挑战 |
| 2.1.5 本部分论文的研究目的、研究内容和创新性 |
| 2.1.5.1 研究目的 |
| 2.1.5.2 研究内容 |
| 2.1.5.3 创新性 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.1.1 主要药品和试剂 |
| 2.2.1.2 仪器 |
| 2.2.1.3 试剂配制 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.2.1 CdTe/CdS 核壳 QD 的合成 |
| 2.2.2.2 JM109 感受态细胞的制备 |
| 2.2.2.3 HSV-TK 质粒的转化与提取 |
| 2.2.2.4 QD-TK 的偶联 |
| 2.2.2.5 FL/QD-TK 的制备 |
| 2.2.2.6 QD-TK 和 FL/QD-TK 的表征 |
| 2.2.2.7 细胞培养 |
| 2.2.2.8 分组给药和细胞活性检测 |
| 2.2.2.8.1 细胞转染 |
| 2.2.2.8.2 CdTe/CdS 核壳量子点细胞毒性的分组和给药 |
| 2.2.2.8.3 CdTe/CdS QD-TK 联合 GCV 抗肿瘤的分组和给药 |
| 2.2.2.8.4 近红外量子点细胞毒性的分组和给药 |
| 2.2.2.8.5 近红外 QD-TK 联合 GCV 抗肿瘤的分组和给药 |
| 2.2.2.8.6 FL/QD-TK 细胞毒性的分组和给药 |
| 2.2.2.8.7 FL/QD-TK 联合 GCV 抗肝癌的分组和给药 |
| 2.2.2.8.8 MTT 法检测细胞活性 |
| 2.2.2.9 激光共聚焦荧光显微镜检测细胞内吞和治疗效果 |
| 2.2.2.9.1 激光共聚焦荧光显微镜检测 QD-TK 细胞内吞 |
| 2.2.2.9.2 激光共聚焦荧光显微镜检测 FL/QD-TK 内吞 |
| 2.2.2.9.3 激光共聚焦荧光显微镜观察 QD-TK 联合 GCV 抗肿瘤作用 |
| 2.2.2.10 流式细胞术定量检测细胞凋亡率 |
| 2.2.2.11 Western Blot 法分析 TK 蛋白表达 |
| 2.2.2.12 动物饲养和裸鼠肝癌皮下移植瘤模型的构建 |
| 2.2.2.12.1 动物饲养 |
| 2.2.2.12.2 BALB/c 裸小鼠人肝癌皮下荷瘤模型的建立 |
| 2.2.2.13 HepG2 微小瘤灶形成实验 |
| 2.2.2.14 Bel-7402 荷瘤裸鼠活体成像及生物分布检测 |
| 2.2.2.15 Bel-7402 皮下移植瘤模型的分组和给药 |
| 2.2.2.16 Bel-7402 皮下移植瘤模型的分组治疗效果和安全性评价 |
| 2.2.2.16.1 Bel-7402 皮下移植瘤模型的分组治疗效果 |
| 2.2.2.16.2 Bel-7402 皮下移植瘤模型的安全性评价 |
| 2.2.2.17 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 CdTe/CdS QD-TK 的合成和表征 |
| 2.3.2 CdTe/CdS QD-TK 的细胞毒性研究 |
| 2.3.3 CdTe/CdS QD-TK 联合 GCV 对 Hela 细胞的杀伤作用研究 |
| 2.3.4 细胞水平监测 CdTe/CdS QD-TK 对 Hela 细胞的杀伤作用 |
| 2.3.5 近红外 QD-TK 的合成、表征和细胞毒性 |
| 2.3.6 近红外 QD-TK 的细胞分布和表达研究 |
| 2.3.7 细胞水平评价和监测近红外 QD-TK 联合 GCV 抗肝癌作用 |
| 2.3.8 整体水平监测和评价近红外 QD-TK 联合 GCV 抗肝癌作用 |
| 2.3.9 FL/QD-TK 的合成和表征 |
| 2.3.10 FL/QD-TK 的细胞毒性作用检测 |
| 2.3.11 FL/QD-TK 的肝癌细胞靶向性研究 |
| 2.3.12 FL/QD-TK 联合 GCV 选择性杀伤肝癌细胞的研究 |
| 2.3.13 FL/QD-TK 体内肝癌靶向成像和生物分布研究 |
| 2.3.14 FL/QD-TK 联合 GCV 体内靶向抗肝癌作用和生物安全性研究 |
| 2.4 本章小结 |
| 2.5 参考文献 |
| 第2章 量子点脂质复合体选择性治疗肝癌的体内外研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.1.1 镉系量子点与生物系统的相互作用 |
| 3.1.1.1 镉系量子点的暴露途径 |
| 3.1.1.2 镉系量子点的生物分布、代谢、排泄过程 |
| 3.1.1.3 镉系量子点的细胞内吞和分布 |
| 3.1.2 镉系量子点的生物毒性和分子机制 |
| 3.1.2.1 镉系量子点的细胞毒性 |
| 3.1.2.2 镉系量子点的体内毒性 |
| 3.1.2.3 镉系量子点的毒性机制 |
| 3.1.2.4 展望和小结 |
| 3.1.3 利用纳米粒子内源毒性治疗肿瘤 |
| 3.1.3.1 肿瘤细胞——微环境的同与不同 |
| 3.1.3.2 纳米粒子——打破肿瘤微环境平衡 |
| 3.1.3.3 以毒攻毒——肿瘤治疗的新策略 |
| 3.1.4 利用量子点选择性治疗肝癌当前尚未解决的问题与面临的挑战 |
| 3.1.5 本部分论文的研究目的、研究内容和创新性 |
| 3.1.5.1 研究目的 |
| 3.1.5.2 研究内容 |
| 3.1.5.3 创新性 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.1.1 主要药品和试剂 |
| 3.2.1.2 仪器 |
| 3.2.1.3 试剂配制 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.2.1 QD-LC 的合成和表征 |
| 3.2.2.2 细胞培养 |
| 3.2.2.3 分组给药和细胞活性检测 |
| 3.2.2.4 激光共聚焦荧光显微镜检测细胞内吞 |
| 3.2.2.5 流式细胞术定量检测细胞内吞 |
| 3.2.2.6 流式细胞术定量检测细胞凋亡率 |
| 3.2.2.7 ELISA 定量检测 ROS 水平 |
| 3.2.2.8 Western Blot 法分析蛋白表达 |
| 3.2.2.9 动物饲养和小鼠肝癌皮下移植瘤模型的构建 |
| 3.2.2.9.1 动物饲养 |
| 3.2.2.9.2 ICR 小鼠肝癌 H22 皮下荷瘤模型的建立 |
| 3.2.2.10 H22 微小瘤灶形成实验 |
| 3.2.2.11 激光共聚焦荧光显微镜研究 QD-LC 在 H22 皮下移植瘤重分布研究 |
| 3.2.2.12 H22 皮下移植瘤模型的分组和给药 |
| 3.2.2.13 H22 皮下移植瘤模型的分组治疗效果和安全性评价 |
| 3.2.2.13.1 H22 皮下移植瘤模型的分组治疗效果 |
| 3.2.2.13.2 H22 皮下移植瘤模型的安全性评价 |
| 3.2.2.14 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 QD-LC 的合成和表征 |
| 3.3.2 QD-LC 的细胞毒性作用研究 |
| 3.3.3 QD-LC 对细胞的内吞作用和机制研究 |
| 3.3.4 QD-LC 对杀伤肝癌细胞机制研究 |
| 3.3.5 QD-LC 对微小瘤灶生长影响的研究 |
| 3.3.6 QD-LC 对小鼠肝癌 H22 皮下移植瘤的治疗作用研究 |
| 3.3.7 QD-LC 治疗小鼠肝癌 H22 皮下移植瘤的安全性评估 |
| 3.4 本章小结 |
| 3.5 参考文献 |
| 第4章 磁性介孔二氧化硅在肝癌诊治一体化中的应用 |
| 4.1 引言 |
| 4.1.1 M-MSNs 的分类和合成 |
| 4.1.1.1 核壳 M-MSNs |
| 4.1.1.2 空心 M-MSNs |
| 4.1.1.3 卫星 M-MSNs |
| 4.1.1.4 沉积 M-MSNs |
| 4.1.2 M-MSNs 与成像 |
| 4.1.2.1 M-MSNs 与核磁共振 T1 加权成像 |
| 4.1.2.2 M-MSNs 与核磁共振 T2 加权成像 |
| 4.1.2.3 M-MSNs 与多模式成像 |
| 4.1.3 M-MSNs 与治疗 |
| 4.1.3.1 M-MSNs 用于磁靶向输送药物 |
| 4.1.3.2 M-MSNs 用于可控释放药物 |
| 4.1.3.2.1 基于磁核的 M-MSNs 磁热响应性释药 |
| 4.1.3.2.2 基于介孔表面功能化的 pH、酶、氧化还原响应性释药 |
| 4.1.3.2.3 基于 M-MSN 外表面的质子泵响应释药 |
| 4.1.3.3 M-MSNs 用于磁热治疗 |
| 4.1.3.4 M-MSNS 用于诊治一体化 |
| 4.1.4 Janus 型 M-MSNs |
| 4.1.4.1 Janus 型纳米粒子 |
| 4.1.4.2 Janus 型 M-MSNs |
| 4.1.5 肝癌化疗中当前尚未解决的问题与面临的挑战 |
| 4.1.6 本部分论文的研究目的、研究内容和创新性 |
| 4.1.6.1 研究目的 |
| 4.1.6.2 研究内容 |
| 4.1.6.3 创新性 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.1.1 主要药品和试剂 |
| 4.2.1.2 仪器 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.2.1 Fe3O4纳米粒子的合成 |
| 4.2.2.1.1 Fe3O4纳米粒子的合成原理 |
| 4.2.2.1.2 Fe3O4纳米粒子的合成步骤 |
| 4.2.2.2 Janus 型 M-MSNs 的合成 |
| 4.2.2.2.1 Janus 型 M-MSNs 的合成原理 |
| 4.2.2.2.2 Janus 型 M-MSNs 的合成步骤 |
| 4.2.2.3 FITC 标记的 Janus 型 M-MSNs 的合成达 |
| 4.2.2.4 羧基化的 JANUS 型 M-MSNS 的合成 |
| 4.2.2.5 PEG 化的 Janus 型 M-MSNs 的合成 |
| 4.2.2.6 药物吸附、释放和浓度测定 |
| 4.2.2.6.1 DOX 吸附实验 |
| 4.2.2.6.2 DOX 释放试验 |
| 4.2.2.6.3 DOX 浓度测定 |
| 4.2.2.6.4 DOX 与 M-MSNs-PEG 作用测定 |
| 4.2.2.7 Janus 型 M-MSNs-DOX 表征 |
| 4.2.2.8 细胞培养 |
| 4.2.2.9 分组给药和细胞活性检测 |
| 4.2.2.9.1 M-MSNS 的分组和给药 |
| 4.2.2.9.2 M-MSNs-DOX 的分组和给药 |
| 4.2.2.9.3 SRB 法检测细胞活性 |
| 4.2.2.10 激光共聚焦荧光显微镜检测细胞内吞和药物释放 |
| 4.2.2.10.1 激光共聚焦荧光显微镜检测细胞内吞 |
| 4.2.2.10.2 激光共聚焦荧光显微镜检测 DOX 释放 |
| 4.2.2.11 流式细胞术检测细胞内吞和药物释放 |
| 4.2.2.11.1 流式细胞术定量检测细胞内吞 |
| 4.2.2.11.2 流式细胞术检测细胞内吞机制 |
| 4.2.2.11.3 流式细胞术检测定量 DOX 的释放 |
| 4.2.2.12 普鲁士蓝染色法检测细胞内吞 |
| 4.2.2.13 生物透射电镜研究细胞内吞 |
| 4.2.2.14 动物饲养和小鼠肝癌模型的构建 |
| 4.2.2.14.1 动物饲养 |
| 4.2.2.14.2 BALB/c 裸小鼠人肝癌 HepG2 皮下荷瘤模型的建立 |
| 4.2.2.14.3 ICR 小鼠肝癌 H22 原位荷瘤模型的建立 |
| 4.2.2.15 小鼠肝癌核磁共振成像 |
| 4.2.2.16 小鼠肝癌模型的分组和给药 |
| 4.2.2.16.1 BALB/c 裸小鼠肝癌 HepG2 皮下荷瘤模型的分组和给药 |
| 4.2.2.16.2 ICR 小鼠肝癌 H22 原位荷瘤模型的分组和给药 |
| 4.2.2.17 小鼠肝癌模型治疗效果的评价 |
| 4.2.2.17.1 BALB/c 裸小鼠肝癌 HepG2 皮下荷瘤模型治疗效果的评价 |
| 4.2.2.17.2 ICR 小鼠肝癌 H22 原位荷瘤模型治疗效果的评价 |
| 4.2.2.18 BALB/c 裸小鼠肝癌 HepG2 皮下荷瘤模型安全性评价 |
| 4.2.2.19 BALB/c 裸小鼠肝癌 HepG2 皮下荷瘤模型的生物分布检测 |
| 4.2.2.19.1 普鲁士蓝染色法检测组织脏器铁分布 |
| 4.2.2.19.2 ICP-OES 检测组织脏器铁含量 |
| 4.2.2.19.3 激光共聚焦荧光显微镜检测 M-MSN-FITC 组织脏器分布 |
| 4.2.2.19.4 激光共聚焦荧光显微镜检测 DOX 组织脏器分布 |
| 4.2.2.20 M-MSN-DOX 溶血性评价 |
| 4.2.2.21 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 不同形貌 M-MSNs 的生物分布和溶血性研究 |
| 4.3.2 M-MSNs-PEG 的合成与表征 |
| 4.3.3 M-MSNs-PEG 的细胞毒性作用检测 |
| 4.3.4 M-MSNs-PEG 的细胞内吞作用检测和机制研究 |
| 4.3.5 磁场增强 M-MSNs-PEG 的细胞内吞研究 |
| 4.3.6 M-MSNs-PEG 的载药和释药研究 |
| 4.3.7 磁场增加 M-MSNS-DOX 体外抗肿瘤作用研究 |
| 4.3.8 M-MSNs-DOX 增强肝癌体内 MR 成像效果研究 |
| 4.3.9 磁场增强 M-MSNs-DOX 治疗裸鼠肝癌皮下移植瘤的效果研究 |
| 4.3.10 M-MSNs-DOX 治疗肝癌皮下移植瘤的安全性评价和生物分布研究 |
| 4.3.11 磁场增强 M-MSNs-DOX 治疗小鼠原位肝癌的效果和药物分布研究 |
| 4.4 本章小结 |
| 4.5 参考文献 |
| 第5章 全文总结与研究展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 不足之处 |
| 5.3 研究展望 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 作者简介 |
| 在学期间发表的学术论文 |
| 在学期间主要承担和参与的项目 |
| 在学期间获得的专利 |
| 在学期间获得的奖励 |
| 在学期间参加的会议和活动 |
| 致谢 |
四、靶向治疗用Fe_3O_4 及其白蛋白包被磁性纳米粒子的制备(英文)（论文参考文献）
- [1]生物膜包被的铁纳米粒子通过免疫激活和铁死亡协同抗肿瘤[D]. 林靓茹. 吉林大学, 2021(01)
- [2]Fe3O4@PDA磁靶向间充质干细胞治疗类风湿性关节炎的机制及其毒理学评价[D]. 邵浦. 吉林大学, 2020(08)
- [3]pH响应性聚电解质包覆载药三氧化二钆@介孔二氧化硅纳米粒子在MRI示踪药物靶向治疗肝癌中的应用[D]. 贺克武. 安徽医科大学, 2020(01)
- [4]蛋白质仿生纳米药物用于原位骨肿瘤及淋巴结转移的诊疗研究[D]. 徐志明. 苏州大学, 2019(06)
- [5]刺激响应型仿生纳米药物载体设计及其肿瘤联合治疗的研究[D]. 刘雯. 暨南大学, 2019(03)
- [6]多功能磁性纳米粒子的制备及其在动脉粥样硬化诊疗中的应用[D]. 张水花. 暨南大学, 2019(03)
- [7]纳米红细胞治疗体系联合光热/光动力与化疗对乳腺癌的协同作用研究[D]. 万国运. 天津医科大学, 2019(02)
- [8]超顺磁性氧化铁双模态纳米探针在胰腺癌诊疗中的应用研究[D]. 任帅. 泰山医学院, 2018(06)
- [9]超顺磁性氧化铁纳米粒子的制备及其在大鼠脑部的扩散和分布研究[D]. 郭剑军. 桂林理工大学, 2017(06)
- [10]多功能纳米粒子在肝癌诊治一体化中的应用研究[D]. 邵丹. 吉林大学, 2015(08)