一、透明质酸合成酶的研究进展（论文文献综述）
桑昆昆,刘晓凤,熊智强,张汇,王光强,宋馨,艾连中,夏永军[1]（2021）在《透明质酸分子质量调控进展》文中认为透明质酸（hyaluronic acid, HA）是一种天然的线性聚合物,由β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖和β-1,4-葡萄糖醛酸的重复双糖单元组成,其优良的黏弹性、高保水能力、高生物相容性,在化妆品、保健品、医药、食品等领域有极好的市场前景。分子质量作为HA的主要参数,其大小在HA结构、功能以及各个领域的应用十分重要。利用转座标签技术成功得到透明质酸合成酶（hyaluronic acid synthase, HAS）相关基因以来对HA合成相关基因、HA代谢途径以及提高HA分子质量的研究越来越多。该文主要综述了近几年来利用发酵技术、基因工程、代谢工程技术等提高HA分子质量和产量的研究进展,旨在对未来提高HA产量和生产特定分子质量大小的HA提供参考。
蔡同凯[2]（2020）在《医用透明质酸钠凝胶用于术后防粘连有效性和不良反应研究》文中进行了进一步梳理目的:本试验通过建立盲肠/腹壁损伤模型来考察医用透明质酸钠凝胶对腹腔粘连的防治作用,同时通过腹壁损伤处肌肉与正常侧肌肉的极限载荷比和刚度比考察其对受损肌肉组织愈合的影响;通过对细菌体内外生长和对抗生素药效影响的研究来考察SHA是否会引起术后感染或者影响抗生素的作用;通过对肿瘤生长和转移的影响实验,以确定SHA是否可用于临床腹盆腔肿瘤切除患者的术后防粘连;并通过腹腔注射SHA,考察其在小鼠体内的急性毒性反应。方法:（1）SD大鼠分为假手术组、模型组、低剂量组（0.15 m L/cm2）、高剂量组（0.30 m L/cm2）和市售对照组（0.15 m L/cm2）,在贴近腹腔壁一侧的盲肠造1 cm×2 cm大小针尖样出血的创面,同时在盲肠对应腹壁造成1 cm×2 cm大小的浅表肌肉损伤。盲肠暴露在空气中8 min后按照不同分组分别在盲肠损伤处和腹壁损伤处涂抹生理盐水和不同剂量的SHA,然后将盲肠创面正对着腹壁创面放回腹腔,再轻轻逐层缝合。正常饲养30天后麻醉处死大鼠,“U”型开腹观察大鼠腹腔粘连情况,以Nair粘连5级分类法进行粘连评分;分别从损伤侧和正常侧各剪取一块1 cm×2 cm的肌肉,通过张力测量仪测量两侧肌肉的极限载荷和刚度,考察SHA对损伤肌肉组织愈合的影响。（2）分别测定大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌与不同浓度的SHA共同孵育的生长曲线,观察SHA对两种细菌生长增殖的影响;通过打孔扩散法实验,测定抗生素（注射用头孢噻肟钠、左氧氟沙星注射液、硫酸庆大霉素注射液、注射用青霉素钠及注射用阿奇霉素）单用及SHA与抗生素合用对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌生长抑制的抑菌圈面积,观察该凝胶对抗生素体外药效的影响;通过小鼠腹腔液载菌量的测定,考察SHA在小鼠体内对细菌生长增殖的影响;通过大鼠盲肠损伤模型考察SHA对大鼠细菌感染后腹腔脓肿程度的影响。（3）通过MTT法,考察不同浓度SHA体外对腹、盆腔相关肿瘤细胞（Hela、CT26、HCT116）生长的影响;通过Transwell试验考察不同浓度SHA体外对腹、盆腔相关肿瘤细胞（Hela、CT26、HCT116）迁移的影响;利用裸鼠结肠原位种植瘤模型,通过测量比较瘤块接种4周后不同实验组裸鼠的瘤块体积和瘤重,考察SHA体内对结肠癌HCT116增殖的影响;通过比较接种3周后不同实验组裸鼠的肺和肝脏肿瘤转移率和转移病灶数,考察SHA体内对结肠癌CT26转移的影响。（4）腹腔注射SHA,观察14天内小鼠体重变化和临床表现,14天后观察小鼠脏器病理学变化。结果:（1）模型组粘连评分为3.60±1.26,假手术组粘连评分为0.10±0.32,与模型组比,差异有统计学意义（P<0.001）;低剂量组粘连评分为1.80±1.75,与模型组比,差异有统计学意义（P<0.01）;高剂量组粘连评分为1.73±1.69,与模型组比,差异有统计学意义（P<0.01）;低剂量组和高剂量组极限荷载比和刚度比分别与假手术组和模型组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）不同浓度的SHA对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的生长均无促进作用,反之较高浓度的SHA对该两种细菌均表现出一定的抑制作用;SHA与抗生素合用的抑菌圈面积大小与抗生素单用的抑菌圈面积相比,差异无统计学意义;SHA组小鼠的腹腔液细菌载量与模型组比,差异无统计学意义;在SHA对左氧氟沙星和青霉素钠体内药效影响的试验中,SHA组的腹腔脓肿评分与模型组相比,差异无统计学意义;抗生素单用组和SHA与抗生素合用组的脓肿评分均低于模型组,且差异均有统计学意义;而SHA与抗生素合用组的腹腔脓肿评分和抗生素单用组比,差异均无统计学意义。（3）不同浓度SHA体外不促进Hela、CT26和HCT116三株肿瘤细胞的生长和迁移,在SHA较高浓度时反而表现出抑制肿瘤细胞的生长和转移;SHA不促进裸鼠体内结肠癌HCT116肿瘤细胞的生长;SHA不促进裸鼠体内结肠癌CT26肿瘤细胞的转移,反而表现出抑制CT26肿瘤细胞的转移。（4）小鼠腹腔注射SHA后体重和临床表现无异常。结论:SHA能有效的预防和减轻组织的粘连,并且不影响损伤侧的肌肉愈合;高浓度SHA对细菌生长具有抑制作用,体内外均未影响抗生素的药效;体外实验表明SHA未促进肿瘤细胞Hela、CT26和HCT116的生长和扩散;且高浓度SHA能够抑制体外肿瘤细胞的生长,体内外均可以抑制肿瘤细胞的转移。在剂量为500 mg/kg时,SHA对小鼠表现出明显的毒性反应。因此SHA可被用于腹盆腔肿瘤患者的术后防粘连,并且不影响患者的术后恢复。
金鹏峰[3]（2020）在《不同分子量透明质酸的分离纯化及其在急性肺损伤中的作用研究》文中认为目的:急性肺损伤（ALI）是临床上高病死率的急危重症,作为其治疗手段的机械通气（MV）又常引起呼吸机相关肺损伤（VILI）及呼吸机相关性肺炎（VAP）,造成二次损伤,进一步引起ALI加重。1600 k Da的高分子量透明质酸（HMWHA）可以抑制肺部炎症,有望作为ALI治疗药物。但1600 k Da的HMWHA在市场上仍有空白,相近分子量区间的HMWHA价格十分高昂,因此本实验旨在以价格低廉的宽分布分子量HMWHA为起点,通过进一步的分离纯化,得到窄分布的1600 k Da HMWHA,并通过MV协同低分子量透明质酸（LMWHA）的促炎作用构建体内和体外ALI模型,在该模型上验证所得HMWHA产品的作用,进一步保证分离纯化方法的可行性。方法:（1）分离纯化方法:分别使用半制备液相色谱法、高压均质法和凝胶过滤层析法来分离出分子量约为1600 k Da的HMWHA,以分子量大小、分子量分布和方法稳定性等为指标,确定最佳分离方法及条件参数;（2）动物实验:先通过气道内雾化给药LMWHA协同MV建立大鼠ALI模型,在该模型基础上提前气道雾化给药分离所得不同分子量HMWHA（1500 k Da、1600 k Da、1800k Da）,收集各组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）,以总细胞和中性粒细胞计数,肺组织包埋切片HE染色后观察病理学变化,实时荧光定量PCR（q PCR）检测肺组织细胞炎性因子与趋化因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和KC的m RNA表达量,酶联免疫吸附（ELISA）检测IL-1β、IL-6的蛋白表达量变化为指标,验证分离所得HMWHA对ALI预防治疗的有效性,进而确保所采用分离方法的可行性;（3）细胞实验:以LMWHA处理6 h为模型组,提前给药不同分子量HMWHA为治疗组,另设空白对照组,给药处理完毕后同样用q PCR检测细胞炎性因子和趋化因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和KC的m RNA表达量,ELISA检测IL-1β、IL-6的蛋白表达量,通过体外实验结果进一步验证产品HMWHA的有效性,分离方法的可行性。结果:（1）与半制备液相色谱和高压均质法相比,凝胶过滤层析可得到最接近1600 k Da的HMWHA,且分子量分布较窄,方法和条件稳定;（2）与对照组相比,MV组和MV+LMWHA组大鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞数显着上升,各炎性因子和趋化因子的m RNA表达量与蛋白表达量也显着升高,肺部病理切片显典型ALI形态学特征,其中MV+LMWHA组上升趋势更明显,与MV组具有显着性差异;（3）与MV+LMWHA的模型组相比,不同分子量的MV+HMWHA组大鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞数显着下降,各炎性因子和趋化因子的m RNA表达量与蛋白表达量显着降低,肺部病理切片显示肺组织结构清晰完整,炎性细胞浸润减少;（4）细胞实验中所得各炎性因子和趋化因子的m RNA表达量与蛋白表达量变化趋势和动物实验保持一致。结论:（1）凝胶过滤层析法作为分离分子量窄分布的1600 k Da HMWHA的方法切实可行,另得到1500 k Da和1800 k Da的HMWHA副产品,该方法条件参数稳定,且可根据需要进一步优化并线性放大;（2）高通气量MV可引起肺部损伤,LMWHA会进一步诱导并加重肺部炎症,导致ALI的发生发展;（3）HMWHA对ALI具有预防治疗作用,可显着缓解肺部的炎症损伤,且除1600 k Da的HMWHA以外,1500 k Da和1800 k Da的HMWHA也有近似的治疗作用,可推测HMWHA对ALI的治疗效果存在一定的分子量区间。
李娜[4]（2020）在《改造枯草芽孢杆菌代谢通路合成透明质酸研究》文中进行了进一步梳理透明质酸（Hyaluronic acid,HA）是以尿苷二磷酸-乙酰葡糖胺（UDP-GlcNAc）和尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸（UDP-GlcUA）两种单糖作为底物,通过β-1,3和β-1,4糖苷键交替连接形成二糖单位,作为结构单元重复组成的糖胺聚糖。HA可广泛用于化妆品和药物中。HA的生物学功能与其分子量（MW）直接相关,大分子量透明质酸具有空间填充、抗血管生成和免疫抑制的作用;低分子量透明质酸具有独特的生物学活性,可以刺激成纤维细胞增殖和胶原合成。HA传统制备方法主要是从动物组织中提取,具有感染跨物种病毒的风险。因此,目前商业化的HA生产主要依赖于链球菌属某些减毒菌株的发酵。此过程的生产成本较低,产生的环境污染也较少。然而,链球菌种具有一定的致病性风险,加之遗传背景复杂,可用于遗传改造的基因操作工具较少,限制了这种方法的发展。因此,构建具有较高生物安全性且遗传背景清晰的HA产生菌株是很有必要的。枯草芽孢杆菌（B.subtilis）,通常被认为是安全的菌株,理想的细胞工厂,前人成功的将透明质酸合酶（Hyaluronan synthase,HAS）基因转入枯草芽孢杆菌168中,并且已经进行HA的发酵生产。首先,我们在枯草芽孢杆菌中构建了CRISPR/Cas9双载体系统。其次,我们将枯草芽孢杆菌168中的合成透明质酸相关的基因克隆出来,使用克隆载体PUC119进行连接,转化进大肠杆菌中,用于后续基因相关操作。然后,我们使用重叠延伸PCR技术,分别将GlcUA操纵子、GlcNAc操纵子和tetM操纵子上的基因连接到一起,构建了三个能在大肠杆菌中大量复制的质粒,并且将三个操纵子中的表达单元转化到枯草芽孢杆菌中。最后在摇瓶培养中,我们检测了HA的产量和分子量,通过是否在培养基中添加茶碱小分子的对比,证明了在培养基中添加茶碱小分子,可以增加HA的产量,使HA的产量达到1.81 g/L;同时降低了HA的分子量,使分子量降低到1.01 MDa。证明了茶碱小分子可以调控GlcUA通路的转录。显示了GlcUA分支途径的所有基因（pgcA、gtaB和tuaD）的过表达,和HA的分子量呈负相关,和HA的产量呈正相关。GlcUA操纵子的上游包含P43启动子和茶碱核开关,P43启动子可以增强基因的表达,当向培养基中加入茶碱小分子时,茶碱结合核开关,抑制终止子结构形成,进行转录,增加了UDP-GlcUA的合成,使枯草芽孢杆菌能够高效地合成低分子量的HA。GlcNAc操纵子的上游包含P43启动子和四环素核开关,当向培养基中加入四环素小分子时,四环素结合核开关,抑制终止子结构形成,进行转录,增加UDP-GlcNAc的合成,使枯草芽孢杆菌能够高效地合成高分子量的HA。tetM操纵子的上游包含P43启动子和四环素抗性基因,使枯草芽孢杆菌在培养基中存在四环素情况下仍能正常生长。本文以合成生物学为基础,在枯草芽孢杆菌中构建了可以调控生产特定HA分子质量的代谢通路,为后续小分子调控枯草芽孢杆菌代谢通路,大量生产特定分子量大小的透明质酸提供可能。
李晓波[5]（2020）在《基于振荡型基因表达系统的透明质酸生物合成研究》文中研究指明透明质酸（hyauronic acid,HA）,又称玻尿酸（Hyaluronan）,由于其优异的保水性、润滑性,粘弹性、优良的生物相容性及非抗原性,被广泛应用于食品,化妆品,医疗用品等多个领域,具有广阔的市场前景。传统的HA提取主要通过鸡冠提取,原料来源有限且产量低,提取的透明质酸常混有杂蛋白及其他多糖,提纯困难,不适合大规模生产。目前HA生产的常规方法为微生物发酵生产,常用微生物包括兽疫链球菌、马链球菌等。HA产品对安全性的需求限制了链球菌的发酵应用。因此,构建一种安全经济,营养要求低,产量高的基因工程菌已经成为迫切需要解决的问题。本研究利用合成生物学原理,在食品级安全菌株枯草芽孢杆菌内构建振荡型基因表达回路表达HA,实现了基于重组枯草芽孢杆菌的HA生物合成,同时振荡型基因表达回路克服了传统蛋白表达系统底物分子与目的产物间的供求矛盾,极大改善了工程菌的HA发酵效率,发酵优化产量最高达到8.2 g/L,远高于文献报道的相关重组枯草芽孢杆菌的发酵水平,具有巨大的工业化应用价值。本论文以枯草芽孢杆菌（Bacillus substilis Fast30）为平台菌株,首先利用菌株com QXPA群体感应系统结合tet R/Ptet元件构建了振荡型基因表达调控回路,并通过荧光蛋白表达验证。振荡回路周期性的开关过程有效提高了自诱导启动子PsrfA的表达效率,为后续次级代谢产物重组合成奠定基础。随后将HA合酶基因has A,UDP-葡萄糖脱氢酶基因tua D和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因gta B导入振荡回路构建重组枯草芽孢杆菌表达HA。发酵结束后,利用乙醇沉淀法结合十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）络合沉淀法,分离纯化HA样品,并利用红外光谱及核磁共振氢谱进行定性表征。HA初步发酵产量相比自诱导型单启动子表达模式提高了2.7倍,证实了振荡型基因表达系统对于提高HA产量的重要作用。在此基础上,设计单因素实验及正交实验优化工程菌的发酵工艺,确立了最佳发酵培养基:葡萄糖60 g/L,蛋白胨17.5 g/L,酵母粉7.5 g/L,K2HPO41.5 g/L,Mg SO4·7H2O 2 g/L。最佳发酵条件:8%接种量,p H 7.0,100 ml/250 ml装液量,200 rpm,37℃,发酵30 h。优化产量达到8.2 g/L,平均分子量为3.5×105Da。综上所述,本研究成功在枯草芽孢杆菌内构建了振荡型基因表达系统。基于该系统表达HA,大大提高了工程菌的HA合成效率与表达产量。表达系统高效的自诱导机制简化了工程菌的发酵步骤,降低了生产成本,具有巨大的工业化应用价值。本研究进一步优化确立了工程菌最佳发酵工艺,为后续发酵体系放大奠定了基础。同时本研究为微生物其他次级代谢产物重组高产合成提供了重要的理论基础和技术参考。
王馥新[6]（2020）在《TGF-β1对人卵巢颗粒细胞排卵相关基因的调控及机制研究》文中研究指明目的 排卵是女性维持正常生殖活动的关键环节。排卵障碍是导致女性不孕的重要原因之一。人体中,排卵的发生由促性腺激素精准调控,包括卵母细胞减数分裂重启,卵丘颗粒细胞-卵母细胞复合物（cumulus oocyte complex,COC）形成及细胞外基质重建,COC扩张等一系列步骤。除促性腺激素外,卵巢局部的自分泌/旁分泌因子也在排卵过程中发挥着重要的调控作用。转录生长因子β1（transforminggrowthfactor β1,TGF-β1）是转化生长因子-β超家族的经典成员,人卵母细胞及颗粒细胞发育的各个阶段均有表达,在卵泡发育进程包括排卵的发生中发挥调控作用,是卵巢局部重要的自分泌/旁分泌因子。既往已有少量研究表明,TGF-β1参与卵丘扩张及排卵,但TGF-β1在这一过程中的详细调控机制尚未完全阐明。本课题旨在探讨TGF-β1对人卵巢颗粒细胞排卵相关因子,特别是COC扩张相关透明质酸合成及前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）分泌的调控作用及其信号通路,为深入了解女性排卵生理提供更多资料。方法 第一部分以人原代黄素化颗粒细胞和人永生化卵巢颗粒细胞系（SVOG细胞株）为研究模型,运用RT-PCR、Western Blot、小干扰RNA干扰目的基因表达、酶联免疫法等细胞生物学技术,探讨TGF-β1在人卵巢颗粒细胞中调控透明质酸合成的详细分子机制。第二部分利用人原代黄素化颗粒细胞和SVOG细胞系,首先,探索人卵巢颗粒细胞中TGF-β1调节维生素D受体（Vitamin D receptor,VDR）表达的机制。其次,研究人卵巢颗粒细胞中维生素D对环氧化酶-2（cyclooxygenase 2,COX-2）及其下游产物PGE2合成的影响。最后,探寻TGF-β1和维生素D联合作用下对人卵巢颗粒细胞PGE2合成的影响。结果 第一部分:使用原代和永生化的人卵巢颗粒细胞作为研究模型,我们证实,在人卵巢颗粒细胞中,TGF-β1通过上调透明质酸合酶2（hyaluronan synthases2,HAS2）在细胞中的表达显着促进颗粒细胞透明质酸的合成。使用双重抑制方法,我们证明了 TGF-βⅡ型（TbetaRⅡ）受体和TGF-βⅠ型（ALK5）受体是颗粒细胞介导对TGF-β1刺激作用的功能性受体。同时,我们发现经典的SMAD2/SMAD3-SMAD4信号传导途径是其主要的细胞内信号传导途径,TGF-β1经由此通路上调透明质酸合成酶的表达和随后的透明质酸合成。值得注意的是,我们研究证实转录因子SNAIL是介导TGF-β1信号传导的关键分子,它有助于透明质酸合成的增加。我们的体外研究结果表明,卵巢内TGF-β1在人卵巢颗粒细胞局部透明质酸合成的调节中发挥功能性作用。第二部分:TGF-β1显着促进人卵巢颗粒细胞中VDR的表达。使用TGF-β1Ⅱ型受体抑制剂或特异性小干扰RNA敲低受体表达,可以阻断TGF-β1诱导的VDR表达。同时使用SMAD2和SMAD3的相应小干扰RNA,我们发现TGF-β1 诱导的 VDR 表达部分依赖于 SMAD3 信号通路,而 SMAD2 不参与该过程。进一步,使用化学抑制剂或特异性小干扰RNA抑制ERK1/2通路激活,我们证明了 TGF-β1诱导的VDR表达增强同时涉及ERK1/2信号通路的活化。此外,我们研究证实,在人卵巢颗粒细胞中,维生素D是促进VDR自身表达的功能性因子,维生素D能通过促进VDR表达促进COX-2及其下游产物PGE2合成。TGF-β1显着刺激VDR表达,协同促进维生素D诱导的COX-2表达及PGE2生成。结论 人卵巢颗粒细胞中,TGF-β1通过激活SMAD2、SMAD3和SNAIL通路上调细胞内HAS2的表达,促进颗粒细胞透明质酸的合成。TGF-β1诱导的VDR的表达涉及SMAD3和ERK1/2信号通路的共同激活。维生素D通过与其配体VDR结合,促进卵巢颗粒细胞COX-2表达,增加PGE2生成。TGF-β1通过上调VDR表达,协同促进维生素D诱导的COX-2表达及PGE2生成。本研究从两个方面证实了 TGF-β1参与COC细胞外基质形成的调控,是卵巢中重要的自分泌/旁分泌因子。
吕欢[7]（2020）在《热疗在增强吉西他滨对胰腺癌细胞作用的生物学效应及对细胞间质的初步探索》文中研究指明研究背景:胰腺癌被认为是美国第四大癌症相关病因,且在我国有不断上升的趋势。该疾病的独特生物学使得在疾病发展的早期阶段很难被发现和诊断,并且很快死亡:总的五年生存率大约为6%（范围从2%到9%）。大多数胰腺癌患者在病情发展到晚期之前没有明显的症状。尽管生物标记物的检测可以帮助临床工作提高胰腺癌的可能性,但在临床实施前仍需要较大样本和严格的验证。手术切除被认为是治疗该病的第一选择,但只有不到20%的患者符合手术条件。尽管接受了可能治愈的切除术,但仍有大约70%-90%的患者最终会有全身性复发和晚期相关疾病。对于大多数胰腺癌患者,特别是那些局部晚期和转移性疾病患者,全身化疗是首选治疗方案。吉西他滨作为一种抗肿瘤药物,于1996年被批准作为胰腺癌的一线治疗药物。作为一种新的胞嘧啶核苷衍生物,它在进入人体内后由脱氧胞嘧啶激酶活化,由胞嘧啶核苷脱氨酶代谢。它主要作用于G1/S期,还能抑制核苷酸还原酶,导致细胞内脱氧核苷三磷酸酯减少,并且能抑制脱氧胞嘧啶脱氨酶减少细胞内代谢物的降解,具有自我增效的作用。经相关报道,吉西他滨在中位生存率和总生存率方面优于氟尿嘧啶（5-FU）。在1996年的一项随机对照试验（RCT）中,吉西他滨已成为胰腺癌局部晚期和转移患者的标准治疗方案。随后,一些研究建立了以吉西他滨为中心的联合疗法,如吉西他滨联合白蛋白紫杉醇、厄洛替尼、卡培他滨、氟尿嘧啶等。尽管对联合治疗方案的研究进展迅速,但总生存率和中位生存率的改善并不令人欣慰。近年来,研究方向已经开始瞄准复杂的FOLFIRINOX方案。在FOLFIRINOX方案中,三种药物的协同作用对76岁以下的患者提供了良好的性能状态,但同时药物毒性也相应增加。为了探索更多的治疗方案,美国和其他一些国家已经进行了许多临床试验,各种组合疗法可能在未来成为一种可能。热疗被认为是一种有效的辅助治疗方法,且已有几十年的研究经验。其非侵入性方法是将肿瘤组织的温度升高约41-42℃,并由此产生直接的细胞杀伤作用。由于不同肿瘤之间的微环境是不同的,不同细胞系之间的热剂量-反应关系可以产生自发的改变。热疗的机制可能是靶向细胞结构,如细胞膜、细胞骨架、大分子的合成等,并干扰它们的过程和功能,但仍需进一步研究。此外,热休克蛋白（HSP）等多种基因的表达也会受到热的影响。经相关报道,温和的热疗可以通过产生活性氧引起自噬性死亡来增强胃癌细胞的抗癌作用和化疗敏感性。另外,全身热疗可能有助于自然杀伤细胞（NK）和各种类型白介素（IL）和其他细胞因子的血浆水平的升高,这些细胞因子与机体免疫密切相关。根据这些特点,热疗结合多种不同的治疗方法,如化疗、手术、单克隆抗体和免疫疗法等,以获得更好的临床治疗效果。本文采用吉西他滨（盐酸吉西他滨）、热疗或吉西他滨联合热疗治疗胰腺癌细胞PANC-1,并从细胞增殖、细胞凋亡、ROS的形成及与肿瘤细胞凋亡、增殖和透明质酸生成相关蛋白的表达等方面分析三种治疗方法的抗肿瘤作用,以期探讨热疗对胰腺癌细胞作用的分子机制。目的:⑴检测吉西他滨和热疗治疗人胰腺癌细胞系PANC-1的效果及对细胞凋亡的影响;⑵分析比较三种治疗方法作用48小时和72小时后人胰腺癌细胞系PANC-1中抗凋亡蛋白的表达以及Caspase家族蛋白的表达情况,以此探究热疗诱导细胞凋亡可能的信号通路和机制。（3）初步探索PANC-1表面透明质酸合成酶和降解酶的表达情况,为靶向细胞间质的研究提供大致方向。方法:采用蜂巢式细胞培养皿培养人胰腺癌细胞系PANC-1,不同浓度的吉西他滨（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）、热疗1小时及二者联用处理24、48、72小时后收集细胞爬片。采用MTT、H&E染色、流式细胞术等相关技术检测人胰腺癌细胞系PANC-1对三种治疗方法的反应的差异和ROS的产生;通过免疫细胞化学（ICC）、Western blot、TUNEL和免疫荧光等方法检测三种治疗方法处理后人胰腺癌细胞系PANC-1中抗凋亡蛋白、Caspase家族执行蛋白以及与肿瘤间质透明质酸表达高度相关的酶的表达情况。结果:（1）MTT结果显示,热疗增强化疗药物吉西他滨（以下简称化疗）对胰腺癌细胞系PANC-1细胞活力的抑制作用。单独化疗和热化疗的效果呈吉西他滨浓度梯度依赖性。（2）H&E染色结果发现,三种治疗方法处理的人胰腺癌细胞系PANC-1的形态发生不同程度的改变,细胞数目和密度有不同程度的减少。（3）流式细胞术检测结果表明,在暴露于化疗、热疗或热化疗后,活性氧48小时内在线粒体被有效激活。在48小时时间点之后,任何治疗组的ROS数量都急剧减少,提示化疗、热疗及热化疗在施用48小时后诱导活性氧物质产生的效果明显下降。在单独热疗、化疗或热化疗结合治疗组中,胰腺癌细胞都出现了不同程度的凋亡,且热化疗组的细胞凋亡比例和程度高于任何单独治疗组。（4）施用不同的治疗方案后,胰腺癌细胞中抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）和肿瘤特异性凋亡抑制蛋白Survivin均表达下调,热化疗组下调更明显。信号传导及转录激活蛋白-3（signal transducer and activator of transcription-3,Stat-3）和半乳糖凝集素-1（Galectin-1）均有不同程度的表达下调,提示热疗可能与核内转录因子有关。此外,免疫荧光和Western blot的结果同时证明,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase）也参与到热疗促细胞凋亡的进程中。作为Caspase家族蛋白信号通路上的不同角色,Caspase-3,8,9在不同治疗方法中被有效激活。（4）透明质酸合成酶-2（HAS-2）与透明质酸降解酶-1（HYAL-1）的表达均有不同程度的改变,提示细胞间质透明质酸的含量和浓度也与肿瘤细胞表面酶的活性有关。结论:（1）热疗可以有效的在短时间内抑制胰腺癌细胞系PANC-1的细胞活力,但随时间此抑制作用逐渐减弱。综合治疗（热疗联合化疗）的效果要优于任何单一治疗方法。（2）热疗可以在较短时间内大量激活胞内ROS的产生并导致细胞凋亡,这种致凋亡方式在48小时后作用大幅减弱。（3）热疗可通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2,Survivin来促进胰腺癌细胞凋亡。（3）核内转录激活蛋白Stat-3和半乳糖凝集素Galectin-1也参与热疗促细胞凋亡的过程中。（4）另外,Caspase家族蛋白及相关通路也与热疗导致细胞凋亡部分相关,包括线粒体途径的Caspase-9和死亡受体途径的Caspase-8,最终由Caspase家族蛋白的执行蛋白Caspase-3执行细胞凋亡过程。（5）与透明质酸的生成高度相关的HAS-1与HYAL-1在施以热化疗之后均表达下降,提示肿瘤细胞PANC-1表面蛋白水平的变化可能影响细胞间质的结构组成。上述部分凋亡相关蛋白的异常表达可为热疗治疗胰腺癌提供新的探索可能性,并指导更深一步的临床治疗方向。
刘丹丹[8]（2019）在《透明质酸与肺腺癌发展关系的研究》文中研究表明目的:探讨人肺腺癌组织中透明质酸酶、透明质酸合成酶以及CD44、CD147、CD168的表达与不同临床分期的肺腺癌发展之间的关系。方法:用常规免疫组织化学的方法筛查50例TNM分期的Ⅰ-Ⅲ期肺腺癌（单纯行手术切除、且无放化疗史患者）病理标本中透明质酸酶亚型1-4、透明质酸合成酶亚型（HAS1、HAS2、HAS3）、CD44、CD147、CD168的表达,显微镜观察并显微摄影。用Image-Pro plus 6.0软件对所获取图像进行图像分析,并获取IOD值,将此IOD用spss22.0软件进行方差分析、相关性分析及回归分析;使用R语言,用scale（）函数将此IOD标准化,再分别将不同分期的、标准化后的透明质酸合成酶、透明质酸酶和透明质酸片段生成密切相关的透明质酸合成酶与透明质酸酶的标准化数值计算平均值;利用百分位数函数计算0.8、0.6、0.4、0.2各百分位数的值,再与该平均值比较,从而获得在不同分期中,透明质酸合成酶、透明质酸酶及其二者催化作用的综合评价。结果:1.透明质酸合成酶的合成能力综合评价:透明质酸合成酶的表达在IA期较高,随即IB期时迅速降低,至IIA期时达到高峰,然后又降到非常低的水平,发展至III期时透明质酸合成酶的表达又有所增加。2.透明质酸酶的分解能力综合评价:透明质酸酶的表达从I期到III期是逐渐增加。3.透明质酸片段产生能力的综合评价:随着TNM分期的由低到高,透明质酸产生的数量由I期到II期是逐渐增加的,到III期的时候又逐渐减少,但仍然较I期多。4.透明质酸合成酶1-3的表达:透明质酸合成酶1,IA组、IB组、IIA组、IIB组和|III组相互之间无显着性差异（p>0.05）;III组的透明质酸合成酶2的表达较IA组、IB组的表达显着增多（p<0.05）,与IIA组、IIB组的表达无显着差异（p>0.05）;透明质酸合成酶3,IA、IB、IIA、IIB、III组之间均无显着性差异（p>0.05）。5.透明质酸酶1-4的表达透明质酸酶1的表达,IA组、IB组、IIA组、IIB组、III组相互之间的透明质酸酶1的表达无显着性差异（p>0.05）;透明质酸酶2的表达,IA组、IB组、IIA组、IIB组、III组相互之间的透明质酸酶2的表达无显着性差异（p>0.05）;透明质酸酶3的表达,IA组、IB组、IIA组、IIB组相互之间的表达无显着性差异（p>0.05）;与IIB组相比,III组与IIB组之间有显着性差异（p<0.05）;透明质酸酶4的表达,与IA组相比,IB组、IIA组、IIB组与IA组之间无显着性差异（p>0.05）,III组与IA组之间有显着性差异（p<0.05）;与IB组相比,IA组、IIA组、IIB组与IB组之间无显着性差异（p>0.05）,III组与IB组之间有显着性差异（p<0.05）;与IIA组相比,IIB组、IA组、IB组与IIA组之间无显着性差异（p>0.05）,III组与IIA组之间有显着性差异（p<0.05）;与IIB组相比,IA组、IB组、IIA组与IIB组之间无显着性差异（p>0.05）,III组与IIB组之间有显着性差异（p<0.05）。6.透明质酸受体（CD类）的表达:III组的CD44表达较IA组、IB组和IIB组的表达有显着性差异（p<0.05）;III组CD147的表达较IA组、IB组、IIA组、IIB组的表达有显着性差异（p<0.05）;III组均较IA组、IB组、IIB组的CD168表达有显着性差异（p<0.05）,与IIA组相比无显着性差异（p>0.05）。结论1.透明质酸前体的合成主要由透明质酸合成酶1和透明质酸合成酶2催化。随肺腺癌TNM分期而变化的酶是透明质酸合成酶2。随着TNM分期由I期向III期发展,透明质酸合成酶2的表达从I期到II期显着增多,但II期到III期表达无显着性变化,这种变化与透明质酸酶3和透明质酸酶4的显着增多有关。2.随着TNM分期由低到高,透明质酸片段产生的能力由I期到II期是逐渐增强的,到III期的时候又逐渐减弱,但仍然较I期强。透明质酸的产生主要由透明质酸合成酶1和2亚型合成长链透明质酸前体,然后由透明质酸酶分解为短链透明质酸片段来发挥肿瘤转移作用。其中,透明质酸酶1和透明质酸酶4是最重要的分解酶,它们的显着作用贯穿于肺腺癌的I期、II期和III期。3.透明质酸酶1在肺腺癌组织中的表达主要通过CD147传递给细胞,使细胞增殖,促进非小细胞肺癌发展,同时,CD44、CD147、CD168的表达与肺腺癌的TNM分期有关。
张大威,陈向阳,査国春[9]（2019）在《膝骨关节炎软骨细胞中骨桥蛋白表达及意义》文中认为目的探讨膝骨关节炎软骨细胞中骨桥蛋白表达及意义.方法选取行人工膝关节置换术患者28例,收集膝骨关节炎软骨标本,体外培养软骨细胞,分为空白对照组、siRNA组（siRNA脂质体2000转染软骨细胞）、重组人骨桥蛋白刺激组（1 mg/L重组人骨桥蛋白干预软骨细胞）.酶联免疫吸法检测细胞培养上清液中IL-18,IFN-γ,IL-6,TNF-α水平; RT-PCR检测透明质酸合成酶mRNA表达水平.结果转染48 h后,空白对照组、siRNA组、重组人骨桥蛋白刺激组中膝骨关节炎软骨细胞的骨桥蛋白mRNA和蛋白相对表达量差异具有统计学意义（P<0.01）;其中siRNA组骨桥蛋白mRNA和蛋白相对表达量明显降低,重组人骨桥蛋白刺激组明显提升. siRNA组细胞培养液中IL-18,IFN-γ,IL-6,TNF-α水平明显低于空白对照组、重组人骨桥蛋白刺激组,差异具有统计学意义（P<0.01）;重组人骨桥蛋白刺激组细胞培养液中IL-18,IFN-γ,IL-6,TNF-α水平明显高于空白对照组、siRNA组,差异具有统计学意义（P<0.01）.siRNA组透明质酸合成酶1、透明质酸合成酶2、透明质酸合成酶3 mRNA相对表达量明显高于空白对照组、重组人骨桥蛋白刺激组,差异具有统计学意义（P<0.05）;重组人骨桥蛋白刺激组透明质酸合成酶1、透明质酸合成酶2、透明质酸合成酶3 mRNA相对表达量明显低于空白对照组、siRNA组,差异具有统计学意义（P<0.01）.结论下调膝骨关节炎软骨细胞中骨桥蛋白表达可抑制炎症因子分泌,促进透明质酸合成,改善膝骨关节炎病情.
罗伟,张方杰,李宇晟,雷光华[10]（2016）在《骨桥蛋白对人膝骨关节炎软骨细胞透明质酸表达的影响》文中研究指明背景:在骨关节炎病程中,骨桥蛋白水平和透明质酸水平的改变可以使一系列细胞因子和酶表达水平改变,但是软骨细胞中骨桥蛋白高表达是否与透明质酸高表达相关目前尚不清楚。目的:通过调节体外培养人膝骨关节炎软骨细胞的骨桥蛋白水平,观察其对软骨细胞透明质酸表达水平的影响。方法:从人膝骨关节炎软骨组织标本中获取并体外培养软骨细胞,实验分为3组:空白对照组不进行任何干预,骨桥蛋白干预组以1 mg/L重组人骨桥蛋白干预,骨桥蛋白siR NA组以骨桥蛋白siR NA进行干预。采用real time PCR法检测各组骨桥蛋白,透明质酸合成酶1,透明质酸合成酶2和透明质酸合成酶3 mR NA表达,ELISA法检测透明质酸水平。结果与结论:（1）与空白对照组相比,重组人骨桥蛋白干预组透明质酸合成酶1,2,3表达升高,而骨桥蛋白siR NA干预组透明质酸合成酶1,2,3表达下降,3组间透明质酸合成酶1,2,3表达比较差异均有显着性意义（P<0.05）;（2）重组人骨桥蛋白干预组软骨细胞透明质酸表达显着高于空白对照组和骨桥蛋白siR NA干预组（P<0.05）。（3）结果说明,提示骨桥蛋白可以通过刺激透明质酸合成酶分泌进而诱导骨关节炎软骨细胞透明质酸表达。
二、透明质酸合成酶的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、透明质酸合成酶的研究进展（论文提纲范文）
（1）透明质酸分子质量调控进展（论文提纲范文）
| 1 发酵水平调控透明质酸分子质量 |
| 1.1 通过pH调控透明质酸分子质量 |
| 1.2 通过溶氧调控透明质酸分子质量 |
| 1.3 通过培养基组成与比例调控透明质酸分子质量 |
| 1.4 通过细胞膜通透性调控透明质酸分子质量 |
| 2 分子水平调控透明质酸分子质量 |
| 2.1 调控透明质酸合成前体浓度 |
| 2.2 透明质酸合成途径的代谢调控 |
| 2.3 调控HAS和透明质酸酶 |
| 3 展望 |
（2）医用透明质酸钠凝胶用于术后防粘连有效性和不良反应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 医用透明质酸钠凝胶防粘连有效性研究 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第二部分 SHA对细菌生长、抗生素药效及大鼠术后细菌感染的影响研究 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第三部分 SHA对肿瘤生长、转移的影响研究 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第四部分 SHA对小鼠急性毒性的研究 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 透明质酸研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的论文专利 |
| 致谢 |
（3）不同分子量透明质酸的分离纯化及其在急性肺损伤中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 透明质酸研究现状 |
| 1.1.1 透明质酸简介 |
| 1.1.2 透明质酸的生理功能与应用 |
| 1.1.3 透明质酸的制备与纯化 |
| 1.1.4 透明质酸与急性肺损伤 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 研究方案 |
| 1.4 预期目标 |
| 第二章 特定分子量HMWHA的分离纯化 |
| 2.1 实验材料与设备 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器与设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 半制备液相色谱法 |
| 2.2.2 高压均质法 |
| 2.2.3 凝胶过滤层析法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 半制备液相色谱法所得HMWHA分子量及分子量分布 |
| 2.3.2 高压均质法所得HMWHA分子量及分子量分布 |
| 2.3.3 凝胶过滤层析法所得HMWHA分子量及分子量分布 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 不同分子量HA在ALI动物模型中的作用探究 |
| 3.1 实验材料与设备 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器与设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 试剂配制 |
| 3.2.2 实验分组 |
| 3.2.3 麻醉及气管插管手术 |
| 3.2.4 支气管肺泡灌洗液的收集 |
| 3.2.5 肺组织样品收集及包埋固定 |
| 3.2.6 BALF中白细胞计数及分类计数 |
| 3.2.7 肺组织HE染色 |
| 3.2.8 肺损伤病理学评分 |
| 3.2.9 肺组织中各炎症因子mRNA表达量的测定 |
| 3.2.10 ELISA检测BALF中细胞因子(IL-1β、IL-6)蛋白表达量 |
| 3.2.11 统计学方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 BALF中总细胞计数及分类计数 |
| 3.3.2 肺组织病理学变化 |
| 3.3.3 各组大鼠肺组织定量组织病理学评分 |
| 3.3.4 肺组织炎症因子mRNA表达量测定 |
| 3.3.5 BALF中细胞炎症因子(IL-1β、IL-6)蛋白表达量测定 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 体外细胞实验验证所得不同分子量HA作用 |
| 4.1 实验材料与设备 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验仪器与设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 试剂配制 |
| 4.2.2 NR8383细胞的复苏、传代、冻存 |
| 4.2.3 实验分组 |
| 4.2.4 细胞实验处理 |
| 4.2.5 q PCR检测细胞炎性因子和趋化因子m RNA表达量 |
| 4.2.6 ELISA检测细胞因子(IL-1β、IL-6)蛋白表达量 |
| 4.2.7 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 炎性因子mRNA表达量测定 |
| 4.3.2 NR8383 细胞炎症因子(IL-1β、IL-6)蛋白表达量测定 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 1 作者简历 |
| 2 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 3 参与的科研项目及获奖情况 |
| 4 发明专利 |
| 学位论文数据集 |
（4）改造枯草芽孢杆菌代谢通路合成透明质酸研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 透明质酸的合成 |
| 1.2 细菌合成透明质酸的代谢过程 |
| 1.3 UDP-GLCNAC的生物合成途径 |
| 1.4 UDP-GLCUA的生物合成途径 |
| 1.5 透明质酸合成酶 |
| 1.6 人工构建透明质酸代谢通路的研究 |
| 1.7 调控合成透明质酸分子量的研究 |
| 1.8 核开关与基因表达调控 |
| 1.9 CRISPR/CAS9 系统 |
| 1.10 本文的研究背景和内容 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验菌种和质粒 |
| 2.1.4 培养基及溶液配制方法 |
| 2.1.5 生物信息分析软件及网站 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 基因组DNA提取 |
| 2.2.2 质粒DNA提取 |
| 2.2.3 PCR反应 |
| 2.2.4 限制性内切酶酶切 |
| 2.2.5 PCR扩增后体系或者酶切后体系纯化回收 |
| 2.2.6 连接反应 |
| 2.2.7 转化到大肠杆菌感受态细胞 |
| 2.2.8 制备并转化枯草感受态细胞 |
| 2.2.9 引物设计 |
| 2.2.10 重组菌株的鉴定 |
| 2.2.11 蓝白斑筛选 |
| 2.2.12 一步法快速克隆连接反应 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 含有CRISPR/CAS9 系统底盘细胞的构建 |
| 3.1.1 设计引物 |
| 3.1.2 转化含有Cas9 的质粒 |
| 3.1.3 构建pAW014-3g质粒 |
| 3.1.4 转化pAW014-3g质粒 |
| 3.2 构建重组质粒 |
| 3.2.1 引物设计 |
| 3.2.2 PCR扩增 |
| 3.2.3 重组质粒的构建 |
| 3.3 构建3个操纵子 |
| 3.3.1 扩增ugtP、amyE、wprA基因上下游同源臂 |
| 3.3.2 扩增目的基因 |
| 3.3.3 构建重组质粒 |
| 3.4 转化和修复 |
| 3.4.1 转化进枯草杆菌中 |
| 3.4.2 质粒的消除 |
| 3.5 HA的含量和分子量的测定 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（5）基于振荡型基因表达系统的透明质酸生物合成研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 HA分子的结构,分布与理化特性 |
| 1.2 HA的应用 |
| 1.2.1 在医药工业中的应用 |
| 1.2.2 在化妆品工业中的应用 |
| 1.2.3 在食品工业中的应用 |
| 1.3 HA的生产 |
| 1.3.1 动物组织提取法 |
| 1.3.2 微生物发酵法 |
| 1.4 HA的生物合成机理 |
| 1.5 微生物发酵HA的研究进展 |
| 1.5.1 菌种选育 |
| 1.5.2 发酵优化 |
| 1.6 振荡型基因表达系统 |
| 1.7 枯草芽孢杆菌ComQXPA群体感应系统 |
| 1.8 研究的目的和意义 |
| 1.9 研究内容 |
| 2 振荡型基因表达调控系统构建 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 菌株与质粒 |
| 2.1.2 引物 |
| 2.1.3 生化试剂 |
| 2.1.4 仪器与设备 |
| 2.1.5 抗生素 |
| 2.1.6 培养基 |
| 2.1.7 常用溶液配制 |
| 2.1.8 分子生物学操作 |
| 2.1.9 绿色荧光蛋白荧光强度分析 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 振荡型基因表达系统的构建 |
| 2.2.2 振荡型基因表达系统的验证 |
| 2.3 本章小结 |
| 3 HAS基因的克隆表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 菌株与质粒 |
| 3.1.2 引物 |
| 3.1.3 生化试剂 |
| 3.1.4 仪器与设备 |
| 3.1.5 抗生素 |
| 3.1.6 培养基 |
| 3.1.7 常用溶液配制 |
| 3.1.8 分子生物学操作 |
| 3.1.9 HA样品检测 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 表达质粒pOSI-has的构建 |
| 3.2.2 工程菌Basillus substilis Fast30△comA/pOSI-has 的构建 |
| 3.2.3 产物HA分子的定性表征 |
| 3.2.4 HA发酵表达 |
| 3.3 本章小结 |
| 4 HA发酵条件优化 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试剂与药品 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 实验菌种 |
| 4.1.4 培养基 |
| 4.1.5 常用溶液配制 |
| 4.1.6 实验方法 |
| 4.1.7 分析方法 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 培养基优化实验结果 |
| 4.2.2 培养条件优化实验结果 |
| 4.2.3 HA特征粘度回归直线的绘制 |
| 4.3 本章小结 |
| 5 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（6）TGF-β1对人卵巢颗粒细胞排卵相关基因的调控及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 TGF-β1通过上调透明质酸合成酶2的表达促进人卵巢颗粒细胞合成透明质酸 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 TGF-β1通过上调人卵巢颗粒细胞中维生素D受体表达促进维生素D诱导的前列腺素E2合成 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述(一) 卵丘颗粒细胞-卵母细胞复合物细胞外基质形成在女性生殖中的作用 |
| 参考文献 |
| 文献综述(二) 维生素D在女性卵巢中的作用及其对女性生育的影响 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（7）热疗在增强吉西他滨对胰腺癌细胞作用的生物学效应及对细胞间质的初步探索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验细胞系 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 MTT |
| 2.3 H&E染色 |
| 2.4 流式细胞仪检测 |
| 2.5 TUNEL |
| 2.6 免疫细胞化学染色 |
| 2.7 总蛋白提取及Western blot |
| 2.8 免疫荧光 |
| 结果 |
| 1.热疗对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖的作用 |
| 2.热疗对PANC-1细胞凋亡的作用 |
| 3.热疗促进吉西他滨诱导PANC-1细胞ROS生成 |
| 4.各个治疗组中蛋白水平上Bcl-2、Survivin、Stat-3的表达情况 |
| 5.Galectin-1在各组的表达情况 |
| 6.热疗通过Caspase家族蛋白途径诱导PANC-1细胞的凋亡,并且增强吉西他滨诱导的PANC-1细胞的凋亡 |
| 7.与细胞间质透明质酸的生成高度相关的两种酶:透明质酸合成酶HAS-2与透明质酸降解酶HYAL-1在细胞系上表达的变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 改善药物输送环境及发挥免疫功能-热疗针对多个靶点的可能性 |
| 参考文献 |
| 附录 英文缩略词索引 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（8）透明质酸与肺腺癌发展关系的研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词 |
| 第1章 综述 |
| 1.1 肿瘤的生物化学特点 |
| 1.1.1 肿瘤有氧糖酵解 |
| 1.1.2 有氧糖酵解对肿瘤发展的影响 |
| 1.2 细胞外基质与肿瘤的关系 |
| 1.3 透明质酸与肿瘤 |
| 1.3.1 透明质酸 |
| 1.3.2 透明质酸的来源与分布 |
| 1.3.3 透明质酸在肿瘤发生和进展中的作用 |
| 1.4 透明质酸及其受体与肿瘤的关系 |
| 1.4.1 CD44 |
| 1.4.2 EMMPRIN |
| 1.4.3 RHAMM |
| 1.5 肺癌与透明质酸 |
| 1.5.1 肺癌的分型及诊断现状 |
| 1.5.2 肺癌与透明质酸 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 组织标本收集 |
| 2.1.2 临床病理资料 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要实验器材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 病理标本制备 |
| 2.2.2 免疫组织化学染色 |
| 2.2.3 结果判定和图像分析 |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 HAS1、HAS2、HAS3在肺腺癌组织中的表达 |
| 3.1.1 免疫组织化学染色结果 |
| 3.1.2 图像分析结果 |
| 3.1.3 使用R语言的统计方法分析HAS合成能力的综合评价结果 |
| 3.2 透明质酸酶 1、透明质酸酶 2、透明质酸酶 3、透明质酸酶在肺腺癌组织中的表达 |
| 3.2.1 免疫组织化学染色结果 |
| 3.2.2 图像分析结果 |
| 3.2.3 通过R语言的统计方法分析透明质酸酶分解能力的综合评价结果 |
| 3.2.4 透明质酸片段产生能力的综合评价结果 |
| 3.3 CD44、CD147、CD168在肺腺癌组织中的表达 |
| 3.3.1 免疫组织化学染色结果 |
| 3.3.2 图像分析结果 |
| 3.4 ⅠA组、ⅠB组、ⅡA组、ⅡB组和Ⅲ组的CD44、CD147、CD168、HAS1-3和透明质酸酶1-4的相关分析和回归分析结果 |
| 3.4.1 ⅠA组的相关分析和回归分析结果 |
| 3.4.2 ⅠB组的相关分析和回归分析结果 |
| 3.4.3 ⅡA组的相关分析和回归分析结果 |
| 3.4.4 ⅡB组的相关分析和归回分析结果 |
| 3.4.5 Ⅲ组的相关分析和回归分析结果 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得科研成果 |
| 致谢 |
（9）膝骨关节炎软骨细胞中骨桥蛋白表达及意义（论文提纲范文）
| 1 对象与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 细胞分离与培养 |
| 1.3.2 细胞转染与鉴定 |
| 1.3.3 细胞培养上清液中炎症因子检测 |
| 1.3.4 RT-PCR检测 |
| 1.3.5 Western blot检测 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 膝骨关节炎软骨细胞形态及转染情况鉴定 |
| 2.2 各组细胞培养液中IL-18, IFN-γ, IL-6, TNF-α水平检测 |
| 2.3 各组透明质酸合成酶mRNA表达水平 |
| 3 讨论 |
（10）骨桥蛋白对人膝骨关节炎软骨细胞透明质酸表达的影响（论文提纲范文）
| 文章快速阅读: |
| 文题释义: |
| 骨桥蛋白 |
| 反转录酶 |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 纳入标准 |
| 1.3.2 排除标准 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 人膝骨关节炎软骨细胞体外培养 |
| 1.4.2 人膝骨关节炎软骨细胞传代 |
| 1.4.3 软骨细胞骨桥蛋白si RNA的转染 |
| 骨桥蛋白特异性si RNA片段按照Reynolds A[18]总结出理性设计有效si RNA的8条原则 |
| 细胞转染 |
| 1.4.4 软骨细胞骨桥蛋白si RNA转染效率的鉴定和筛选 |
| 1.4.5 分组干预实验 |
| 1.4.6 总RNA样本制备 |
| 1.4.7 总RNA反转录反应 |
| 1.4.8 Real time Q PCR反应 |
| 1.4.9 Western blot检测蛋白表达 |
| 1.4.1 0 ELISA法检测透明质酸浓度(检测范围及各标准品浓度:0,50,100,500,1 000,2 000 ng/L) |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 人膝骨性关节炎软骨细胞形态及骨桥蛋白si RNA转染鉴定 |
| 2.2 标准曲线绘制及分析 |
| 2.3 各组间骨桥蛋白m RNA、骨桥蛋白蛋白、透明质酸合成酶1,2,3 m RNA以及透明质酸表达的差异 |
| 3 讨论Discussion |
| 结论 |
| 作者贡献 |
| 利益冲突 |
| 伦理问题 |
| 文章查重 |
| 文章外审 |
| 作者声明 |
| 文章版权 |
四、透明质酸合成酶的研究进展（论文参考文献）
- [1]透明质酸分子质量调控进展[J]. 桑昆昆,刘晓凤,熊智强,张汇,王光强,宋馨,艾连中,夏永军. 食品与发酵工业, 2021(11)
- [2]医用透明质酸钠凝胶用于术后防粘连有效性和不良反应研究[D]. 蔡同凯. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(05)
- [3]不同分子量透明质酸的分离纯化及其在急性肺损伤中的作用研究[D]. 金鹏峰. 浙江工业大学, 2020
- [4]改造枯草芽孢杆菌代谢通路合成透明质酸研究[D]. 李娜. 吉林大学, 2020(08)
- [5]基于振荡型基因表达系统的透明质酸生物合成研究[D]. 李晓波. 南京理工大学, 2020(01)
- [6]TGF-β1对人卵巢颗粒细胞排卵相关基因的调控及机制研究[D]. 王馥新. 南京医科大学, 2020(06)
- [7]热疗在增强吉西他滨对胰腺癌细胞作用的生物学效应及对细胞间质的初步探索[D]. 吕欢. 大连医科大学, 2020(03)
- [8]透明质酸与肺腺癌发展关系的研究[D]. 刘丹丹. 吉林大学, 2019(03)
- [9]膝骨关节炎软骨细胞中骨桥蛋白表达及意义[J]. 张大威,陈向阳,査国春. 北华大学学报(自然科学版), 2019(04)
- [10]骨桥蛋白对人膝骨关节炎软骨细胞透明质酸表达的影响[J]. 罗伟,张方杰,李宇晟,雷光华. 中国组织工程研究, 2016(42)